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小胞体膜結合性転写因子ATF6は、小胞体ストレスに応答してゴルジ体へ移行し、プロテオリシスを受けて活性化する。本年度では、YFP(黄色蛍光タンパク質)とATF6の融合タンパク質を安定に発現するCHO細胞株を単離し、小胞体ストレスに応答したATF6のゴルジ体移行過程を生細胞において可視化した。その結果、通常の培養条件ではYFP-ATF6の蛍光像は典型的な小胞体の網目構造を呈したが、小胞体条件下ではYFP-ATF6を含む小胞が多数形成され、その小胞が経時的にゴルジ体に集積していく様子が観察された。したがって、ATF6のゴルジ体移行が小胞輸送により行われていることが確認された。このCHO安定発現株にセミインタクト処理を施して細胞内小器官はインタクトなまま細胞質だけを除き、小胞体ストレス下の細胞から調製した細胞質を添加したが、ATF6のゴルジ体移行は起こらなかった。この結果は、細胞質のみを小胞体ストレス状態に変換してもATF6のゴルジ体移行は起こらないことを意味しており、小胞体内腔における制御機構の存在を強く示唆している。
また、ATF6の輸送過程の分子機構をより詳細に解析するために、in vitroにおける再構成実験に取り組み、小胞体ストレス下のCHO細胞から調製した膜画分と、別に調製した細胞質画分、およびATP再生系を用いてATF6の輸送小胞形成を再構成することに成功した。今後、確立した再構成系を応用して、ATF6の輸送小胞形成に関与する因子の同定を行う予定である。
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