RNAウイルスの復製に関与する宿主翻訳伸長因子の普遍的・多様的機能の解析

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17780033
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 山次 康幸 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助手 (40345187)
• キーワード: 翻訳伸長因子1A / ウイルス / Mドメイン

研究概要

RNAウイルスの複製に関与する宿主翻訳伸長因子の普遍的・多様的機能について解析するために、モデルウイルスであるTobacco mosaic virus (TMV)を用いて以下のような解析を行った。
(1)eEF1Aと植物ウイルスゲノムRNAの結合解析
データベース上に登録されている既報の翻訳伸長因子1A(eEF1A)のシークエンス情報を元にNicotiana tabacum cv XanthiからeEF1A cDNAのクローニングを行い、得られたcDNAを発現用ベクターにクローニングし、大腸菌内でeEF1Aを大量に調整した。eEF1AとTMVのゲノムRNAとの結合をGST pull-down法およびゲルシフト法で解析したところ、eEF1AがTMVゲノムRNAの3'非翻訳領域(3'UTR)と特異的に結合することが明らかになった。
(2)eEF1Aと植物ウイルス複製酵素の結合解析
大腸菌内で発現させたeEF1Aを抗原として抗体作製を行ったのちに、抗eEF1A抗体を用いた免疫沈降法によりTMV複製酵素とeEF1Aとの結合を調べた。その結果、TMV複製酵素とeEF1AがTMV感染植物細胞内で結合していることが明らかになった。TMV複製酵素とeEF1Aの結合はウイルスRNAを分解した状態でも変化なく検出されたため、これらの結合はウイルスRNAを介さない直接の結合であることが示された。さらに、GST pull-down法およびyeast two-hybrid法を用いた解析によりeEF1AはTMV複製酵素N末端のMドメインと結合することが示された。植物RNAウイルスの複製酵素とeEF1Aが結合したとする報告はこれが初めてであり、またeEF1AがRNAウイルスのゲノムRNAと複製酵素の双方に結合するという報告は植物、動物、細菌を通じてこれが初めてである。

研究成果

• [雑誌論文] In vivo interaction between Tobacco mosaic virus RNA-dependent RNA polymerase and host translation elongation factor 1A. (2006)
  • 著者名/発表者名: Yamaji, Y., Kobayashi, I., Hamada, K., Sakurai, K., Yoshii, A., Suzuki, M., Namba, S., Hibi, T.
  • 雑誌名: Virology (in press)
• [雑誌論文] The efficiency of interference of Potato virus X infection depends on the target gene. (2006)
  • 著者名/発表者名: Takahashi, S., Komatsu, K., Kagiwada, S., Ozeki, J., Mori, T., Hirata, H., Yamaji, Y., Ugaki, M., Namba, S.
  • 雑誌名: Virus Research 116 ページ: 214-217
• [雑誌論文] Phylogenetic characteristics, genomic heterogeneity and symptomatic variation of five closely related Japanese strains of Potato virus X. (2005)
  • 著者名/発表者名: Komatsu, K., Kagiwada, S., Takahashi, S., Mori, T., Yamaji, Y., Hirata, H., Ugaki, M., Namba, S.
  • 雑誌名: Virus Genes 31 ページ: 99-105
• [雑誌論文] A single amino acid residue of RNA-dependent RNA polymerase in the Potato virus X genome determines the symptoms in Nicotiana plants. (2005)
  • 著者名/発表者名: Kagiwada, S., Yamaji, Y., Komatsu, K., Takahashi, S., Mori, T., Hirata, H., Suzuki, M., Ugaki, M., Namba, S.
  • 雑誌名: Virus Research 110 ページ: 177-182