| 研究概要 |
Streptomyces coelicolor A3(2)M145株で発見されたキチンオリゴ糖のABC輸送系をコードすると考えられる遺伝子群cbiEFG(現在はdasABCと改名)の生物学的機能とその発現制御を明らかにするため,平成17年度は主にin vitroでの解析を行った。平成18年度は下記の通り,in vivoでの解析を行った。
1.dasA遺伝子破壊株の作成と表現型の解析
dasA遺伝子の生物学的機能をin vivoで明らかにするため,薬剤耐性遺伝子をマーカーとして,S.colicolor A3(2)M145株の染色体上に存在するdasA遺伝子を相同組換えによって破壊した。得られたdasA遺伝子破壊株では,キチン単糖(N-アセチルグルコサミン)の輸送活性は野生株と変わらなかったが,キチン二糖(N,N'-ジアセチルキトビオース)の輸送速度は,親株の25%に低下した。このことから,dasA遺伝子が,キチン二糖の輸送に関与することが明らかとなった。また,キチン二糖の存在下でのキチナーゼ生産能を調べたところ,dasA遺伝子破壊株では,キチナーゼ生産のレベルが親株よりも高くなることが見出された。
2.dasABC遺伝子群の転写単位の解析
dasABC遺伝子群はクラスターを形成しており,オペロンとして共転写される可能性が考えられた。そこで,それぞれの転写単位に特異的なプライマーを設計して,逆転写-PCRによって転写産物の有無を調べたところ,dasABCはオペロンではなく,dasA遺伝子は単独で,dasABCはともに転写されることが明らかとなった。
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