| 研究概要 |
還元末端特異的キシラナーゼの立体構造を決定し、その還元末端特異性が、基質結合クレフトの片側をブロックする特異な構造を有するために引き起こされることを解明した(J.Biol.Chem.誌に掲載)。一方、GH94キトビオースホスホリラーゼで、活性中心および基質認識残基の変異体を作成したが、加水分解活性やグルコース特異性を示す変異体は得られなかった。しかし、GH94セロビオースホスホリラーゼにおいて、グルコースと硫酸またはリン酸が結合した2種の複合体構造を、それぞれ2.0Å、2.1Å分解能で決定し、反応機構と基質特異性を明らかにした(論文投稿中。一部はJ.Appl.,Glycosci.誌に掲載)。この結果により得られた2種類のGH94ホスホリラーゼの構造の比較が可能になり、蛋白質工学的手法の適用に必要な構造的基盤が強化された。また、GH54アラビノフラノシダーゼのアラビノース結合ドメイン(CBM42)の結合サイトの機能解析を行った。野生型酵素と結合サイトの破壊変異体を用いて、各種不溶性基質に対する活性測定、ゲルシフト電気泳動などによる結合能の評価、等温滴定カロリメトリー法およびフロンタルアフィニティークロマトグラフィー法による各種オリゴ糖に対する結合定数の測定を行った結果、CBM42が基質アラビノキシランのアラビノフラノース側鎖に特異的に結合することが明らかになった(論文投稿中。一部は、J.Appl.,Glycosci.誌にて印刷中)。
|
