| 研究概要 |
中心体過剰複製の抑制機構を明らかにする目的で,p53ノックアウトマウスから得られた胎仔期上皮系細胞株に生じている中心体過剰複製が長期継代により抑制されることに着目し,マイクロアレイ法を用いてこれに関与する遺伝子を解析した。その結果,BubR1が長期継代培養細胞株(PL)において発現が増加していることが明らかとなった。そこでsiRNA法を用いてPLにおけるBubR1の発現を抑制したところ,長期継代細胞における中心体過剰複製が再発現することが確認された。また,中心体過剰複製の認められる早期継代細胞(PE)にBubR1を遺伝子導入したところ,急激な中心体過剰複製数の抑制と核の断片化を伴う細胞死が認められ,中心体過剰複製している細胞が特異的に死滅している可能性が示唆された。さらに,BubR1の発現はp53によって誘導されている可能性も示唆され,p53の不活化した細胞ではBubR1の発現低下により正常な有糸分裂チェックポイント機構が働かないために中心体過剰複製した細胞が排除できない可能性が示唆された。次に,遺伝子治療の標的としてBubR1が有用かを明らかにすることを目的としてp53の変異が報告されている6種類のヒト膀胱由来腫瘍細胞とp53に変異の認められない1種類のヒト膀胱由来腫瘍細胞にBubR1遺伝子を導入し,導入後の中心体数,生細胞数ならびに増殖能を解析した。その結果,BubR1を導入することでp53に変異を有する6種類の細胞株全てにおいて中心体過剰複製が抑制され,中心体過剰複製を起こしている細胞が死滅し,さらに悪性細胞の増殖能を示すコロニー形成能が低下していた。一方,p53に変異を持たない細胞株では,これらの変化は軽度であった。以上の結果から,腫瘍細胞に対するBubR1遺伝子導入はp53に変異を有する腫瘍細胞に対してのみ腫瘍抑制効果が認められる可能性が強く示唆された。
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