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1.ヒトVEGF-A、VEGF-C、VEGF-D発現ベクターの作成及び培養肺癌細胞への遺伝子導入
RT-PCR法により全長のVEGF-A、VEGF-C、VEGF-D cDNAを得て、発現ベクターpZeoSV2、pcDNAhygro、pcDNAneoに挿入し、ヒトVEGF-A、VEGF-C、VEGF-Dの発現ベクターを作成する。これらを肺癌培養細胞株に遺伝子導入し、以下のtransfectantを得ることに成功している。pZeoSV2-VEGF-A transfected cell、pZeoSV2-VEGF-C transfected cell、pcDNAhygro-VEGF-C transfbcted cell、pcDNAneo-VEGF-C transfected cell、pcDNAneo-VEGF-D transfected cell、pZeoSV2-VEGF-D transfected cell、pZeoSV2-VEGF-A/pcDNAneo-VEGF-C double transfected cell、pZeoSV2-VEGF-A/pcDNAneo-VEGF-D double transfected cell、pcDNAhygro-VEGF-C/pcDNAneo-VEGF-D double transfected cell。これらの細胞株を継代し、cell lysate中のVEGFの発現を調べ、stable transfectantであることを確認した。
2.ヌードマウスへのVEGF-family遺伝子導入肺癌細胞の移植:
上記のごとく作成したVEGF-family導入肺癌培養細胞株間における腫瘍形成能、胸水形成能、胸膜播種形成能、肺の癌性リンパ管症の状態等を評価するため、一定数の各培養細胞株をヌードマウスの尾静脈に注入した。現在、注入したヌードマウスの状態に注意しながら経過観察中である。
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