| 研究課題/領域番号 |
17H01572
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
清水 宏 北海道大学, 医学研究院, 教授 (00146672)
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| 研究分担者 |
新熊 悟 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (00613788)
岩田 浩明 北海道大学, 大学病院, 助教 (20397334)
西江 渉 北海道大学, 医学研究院, 准教授 (20443955)
乃村 俊史 北海道大学, 大学病院, 講師 (50399911)
藤田 靖幸 北海道大学, 大学病院, 講師 (80374437)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 復帰変異モザイク / 表皮水疱症 / 遺伝子編集 / CRISPR/Cas9 / 染色体組換え |
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| 研究実績の概要 |
17型コラーゲン遺伝子特異的CRISPR/Cas9システムの構築
本研究では、マウス17型コラーゲン遺伝子のexon2、exon3、intron2領域を特異的に切断する遺伝子編集技術を応用する必要がある。今回我々は、遺伝子編集技術の中でも特に有効性の高いCRISPR/Cas9システムを用いてターゲット遺伝子の切断を試みている。実際にはin silico softwareを用いて、マウス17型コラーゲン遺伝子のexon2、exon3、intron2領域を特異的に切断可能なガイドRNAを4個ずつ設計した。さらにpEGxxFPシステムを用いてCRISPR/Cas9システムの効率を確認し、それぞれのターゲットに対する高効率なCRISPR/Cas9システムを構築した。
復帰変異モザイクを有する表皮水疱症モデルマウスの作製
17型コラーゲンタンパクを欠損する表皮水疱症患者では、ほぼ全例で復帰変異モザイクを有することが知られている。我々は復帰変異モザイクを有する表皮水疱症モデルマウスを作製している。前述で述べたマウス17型コラーゲン遺伝子のexon 2およびexon 3のある部位を特異的に切断することが可能なCRISPR/Cas9システムをマウス受精卵にinjectionし、マウス17型コラーゲン遺伝子のexon 2およびexon 3にフレームシフト変異を誘導させたヘテロ17型コラーゲン遺伝子欠損マウスを作製した。現在、これらのマウスを交配し、17型コラーゲンのそれぞれのアリルのexon2およびexon3にフレームシフト変異を有する複合ヘテロ接合型17型コラーゲン欠損マウスの作製を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
F0マウス（初代マウス）と野生型マウスの交配で目的としたF1マウスの誕生に時間がかかり、複合ヘテロ接合型17型コラーゲン欠損マウスの作製に時間を要している。
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| 今後の研究の推進方策 |
マウスの交配数を増やし、研究時間の短縮を予定している。
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