| 研究課題/領域番号 |
17H01685
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| 研究機関 | 自治医科大学 |
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研究代表者 |
加藤 大智 自治医科大学, 医学部, 教授 (00346579)
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| 研究分担者 |
山本 雄一 琉球大学, 医学部附属病院, 講師 (00363672)
久保 誠 北里大学, 医療衛生学部, 講師 (40464804)
高木 秀和 愛知医科大学, 医学部, 講師 (90288522)
伊藤 誠 愛知医科大学, 公私立大学の部局等, 客員教授 (90137117)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | リーシュマニア症 / シャーガス病 / ベクター / リザーバー / 分子疫学 / リスク評価 / 血清診断 |
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| 研究実績の概要 |
本年度の研究実績の概要は以下の通りである。1）FTAカードおよび病変部塗抹標本を用いてペルーのリーシュマニア症の広域疫学調査を行った。ペルーからはこれまで報告されていない種や新たなハイブリッド種が分布していることを報告した。2）エクアドルのリーシュマニア症流行地において、サシチョウバエの分布種および原虫保有調査を行った。3）リーシュマニア症流行国でも実施可能な感染原虫種を簡便に同定する方法として、PCR-RFLPを用いた遺伝子タイピング法の確立に成功した。4）エクアドルにこれまで報告のないハイブリッド型のリーシュマニア原虫が分布していることを明らかにした。5）エクアドルにはミトコンドリアDNAと核DNAが一致しない交雑原虫株が分布することを明らかにした。このような遺伝子交雑は原虫で初めての報告である。6）Molecular Mass Screening法を用いてサシチョウバエのリーシュマニア原虫感染を調査した。7）ペルーのリーシュマニア症流行地でベクター調査を行い、サシチョウバエの未記載種を発見した。また、未記載種を含めた2種のサシチョウバエからその地域に流行するリーシュマニア原虫を検出し、これらの種がこの地域のベクターであると考えられた。8）スリランカのリーシュマニア症流行地で疫学調査を行い、ヒトやイヌにおいて血清学的調査を行った。9）スリランカのリーシュマニア症流行地域でサシチョウバエの調査を行い、分布サシチョウバエ種を同定した。10）エクアドル、ペルー、アルゼンチンの原虫検体を用いて、病態リスクファクターとなりうるリーシュマニアRNAウイルス（LRV）の感染を調査した。11）Recombinase Polymerase Amplification (RPA)法および手のひらサイズの電気泳動装置を用いた簡便なリーシュマニア原虫同定法を開発した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
エクアドル、ペルー、スリランカなどの疫学調査を通して、流行原虫種やベクター、リザーバーなどに関する新たな知見を得ることができた。スリランカでのリーシュマニア症の調査を通して、高感度かつ簡便な血清診断法を確立しつつある。ペルーの疫学調査ではリーシュマニア症流行地におけるベクター調査で、未記載種のサシチョウバエを発見するとともに、その種を含めた2種からその地で流行するリーシュマニア原虫を同定することができた。各流行地でのベクター種の同定は非常に困難であり、これは期待していた以上の成果であった。分子診断については、15分程度で原虫遺伝子を増幅できるRPA法を確立し、その増幅産物を自作の手のひらサイズの電気泳動装置によって5分程度で種を同定できる方法を開発した。また、エクアドルに分布するリーシュマニア原虫をPCR-RFLP法を用いて簡便に調査する方法を確立した。これらは高価な装置を必要とせず、流行国でも実施できる簡便な方法であり、今後の疫学調査に有用であると考えられた。PCR-RFLP法による感染原虫種同定法を応用することで、エクアドルに分布するリーシュマニア原虫では非常に複雑な遺伝子交雑が起こっていることを明らかにした。ハイブリッド株とともに同定したミトコンドリア遺伝子と核遺伝子の不一致株は、原虫では初めての報告であり、今後、病原性・感染病態の違いや、媒介されるサシチョウバエ種の広がり等についてさらに追求していく必要があると考えられた。このように、今年度は予期しなかった期待以上の成果がいくつか得られた。
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| 今後の研究の推進方策 |
1）リーシュマニア症およびシャーガス病の広域疫学調査、2）疾病流行地におけるLAMP法を用いた迅速分子診断の実施、3）新興リーシュマニア症の簡易血清診断およびリザーバー調査、4）原虫分離株を用いたLRV感染の検出系の確立、5）PCR法(MS-PCR)およびLAMP法(MS-LAMP)を用いた大規模ベクター調査、6）RPA法を用いた分子診断、7）サシチョウバエおよびサシガメの唾液抗原の発現と免疫学的・機能的解析
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