| 研究課題/領域番号 |
17H03674
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| 研究機関 | 奈良先端科学技術大学院大学 |
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研究代表者 |
末次 志郎 奈良先端科学技術大学院大学, 先端科学技術研究科, 教授 (70345031)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | BARドメイン |
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| 研究実績の概要 |
CIP4とPACSIN2のタンパク質複合体形成を通じた膜形態変換機構
まず、前年度成功した大量精製したYPELは、変性およびリフォールディングを経ているので、正しいフォールドかどうかの確認のゲル濾過などにより評価を試みた。また脂質膜との結合を検討した。さらに、YPEL抗体を用い、細胞内での内在性タンパク質の局在を調べたところ、また内在性のPACSIN2やCIP4との共局在が認められた。
GAS7によるファゴサイトーシスカップ形成と伸長機構の解析
GAS7結合タンパク質を酵母ツーハイブリッド法を行って得られた幾つかの候補タンパク質の細胞内での共局在を調べた。GAS7は、ファゴサイトーシスカップに多く見られるPIP3などの電荷を持った脂質に依存して脂質膜に結合することを見出した。また、脂質膜結合能に依存してファゴサイトーシスカップへ局在し、また、脂質膜結合はファゴサイトーシスカップ形成に必須であった。
IRSp53とCIP4、PACSIN2、GAS7の局在と細胞突起進展の関連の解析
超解像用の蛍光タンパク質とBARタンパク質中でもGAS7について融合タンパク質の安定発現株を、Raw267.4マクロファージ株などを用いて作成した。BARタンパク質の局在をライブイメージングで捉えた。その結果、ファゴサイトーシスカプの先端やラメリポディアの先端での濃縮を確認した。この結果は、ラメリポディアとファゴサイトーシスカップ形成が類似した構造体であることを示唆する他の研究結果とも一致している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
YPELの精製条件の検討に時間を要したがそれ以外には順調に進んでいる。GAS7やIRSp53の形成する突起は形成の炎症反応、特に炎症に付随する網膜形成への関与の可能性を見出したので、その検討を開始した。
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| 今後の研究の推進方策 |
CIP4とPACSIN2のタンパク質複合体形成を通じた膜形態変換機構の解析
まず、前年度成功した大量精製したYPELとCIP4のF-BARドメインとの結合をプルダウン解析により評価することで確かめる。さらに共結晶の作成を試み、結合様式の理解を目指す。引き続き、YPELに対する抗体を作成し、内在性のタンパク質の特に浸潤突起における局在を調べる。また内在性のPACSIN2やCIP4との共局在も調べる。
GAS7によるファゴサイトーシスカップ形成と伸長機構の解析
前年度までにGAS7のファゴサイトーシスカップへの関与を確かめた。本年度は、ファゴサイトーシスの炎症反応などへの関与とGAS7の関与する膜構造形成の関連を調べる。
IRSp53とCIP4、PACSIN2、GAS7の局在と細胞突起進展の関連の解析
BARタンパク質の局在をライブイメージングで捉え、BARタンパク質の間の違いを特にマクロファージ株を用いて明らかにする。さらに炎症反応や網膜の立体構造構築などにおけるBARタンパク質の形成する構造構築の役割を局在を解析し、ついて、局在部位における機能をノックアウトマウスなどで調べる。
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