| 研究課題/領域番号 |
17H03926
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| 研究機関 | 鹿児島大学 |
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研究代表者 |
三浦 直樹 鹿児島大学, 農水産獣医学域獣医学系, 准教授 (80508036)
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| 研究分担者 |
岡本 芳晴 鳥取大学, 農学部, 教授 (50194410)
福島 隆治 東京農工大学, (連合)農学研究科(研究院), 教授 (10466922)
中川 貴之 東京大学, 大学院農学生命科学研究科(農学部), 准教授 (40447363)
畑井 仁 鹿児島大学, 農水産獣医学域獣医学系, 准教授 (40566535)
後藤 章暢 兵庫医科大学, 医学部, 教授 (70283885)
丸山 征郎 鹿児島大学, 医歯学総合研究科, 特任教授 (20082282)
原田 陽一郎 鹿児島大学, 医歯学総合研究科, 特任准教授 (80464147)
川原 幸一 大阪工業大学, 工学部, 教授 (10381170)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | エクソソーム / マイクロRNA / ノンコーディングRNA / 腫瘍 / イヌ / メラノーマ / 肝細胞癌 / 乳腺腫瘍 |
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| 研究実績の概要 |
本研究の一つ目の目標は腫瘍特異的エクソソームを確認することである．腫瘍特異的エクソソームが同定されれば，含有smallRNAの解析により，本申請研究のゴールであるスマートな診断・治療戦略が確立できる．
研究計画の初年度である平成29年度は当初の目的であるエクソソームの抽出方法を検討した．その結果，安定して抽出でき，抽出分子の大きさの解析でもエクソソーム分画の抽出を確認できた．抽出は正常なイヌの血液、腫瘍罹患イヌの血液、メラノーマと肝細胞癌の細胞株の上清から抽出した。次に，エクソソーム表面マーカーのスクリーニングの条件を調整検討した．その結果，抽出エクソソームの表面発現マーカーの一次スクリーニングは完了した．今後、スクリーニングした結果を再度，解析予定である．さらに，エクソソーム含有small RNAの次世代シーケンス解析にイルミナ社のHi-Seqシーケンサで行った．今回は培養細胞上清から抽出したエクソソームの含有small RNA分子のプロファイルを確認することができた．次年度にかけて詳細プロファイル解析を行う。
次に研究では細胞株で発見できた新規のsmall RNA（特にマイクロRNAを中心）の新規腫瘍関連分子として位置づけて解析を行い，腫瘍発生・転移メカニズムを解析する.
平成29年度はエクソソームに含有される複数のマイクロRNAの発現をリアルタイムPCRで確認できた．特に確認できたメラノーマサンプル間での発現の変化を確認した．イヌの腫瘍サンプル，メラノーマ腫瘍細胞株，細胞株上清のエクソソームの比較で，含有マイクロRNAの比率に変化があることを確認し，エクソソームへの選択的なマイクロRNAの濃縮が確認された．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
研究計画の初年度の目的であるエクソソームの抽出を行えた．抽出は正常なイヌの血液，腫瘍罹患イヌの血液，メラノーマと肝細胞癌の細胞株の上清から抽出した.
エクソソーム表面マーカーのスクリーニングを行えた．抽出エクソソームの表面発現マーカーの一次スクリーニングは完了した．翌年解析予定．
エクソソーム含有small RNAの次世代シーケンス解析を行った．培養細胞上清から抽出したエクソソームの含有small RNA分子を次世代シーケンスでシーケンスを読みとった．次年度にかけて詳細プロファイル解析を行う．
ターゲットとするマイクロRNAの遺伝子導入は行えていない．現在，試薬など検討中.
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| 今後の研究の推進方策 |
初年度のスクリーニング解析はおおむね順調に進んでいる.今後はそのスクリーニングの結果を確認する．確認は各ターゲットとなるsmall RNA分子のリアルタイムPCR等にて行う．同時に表面マーカーに関しては特異的な検出方法を検討する．さらに，細胞株で行っている実験により発見できたマーカー分子を臨床例で確認する.
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