| 研究実績の概要 |
酵母細胞でのホスファチジルイノシトール４リン酸（PtdIns(4)P）を標識する技術を開発し，哺乳類培養細胞におけるオートファゴソームでのPtdIns(4)Pのナノスケールでの分布解析を行った．哺乳類培養細胞には，Huh7細胞を用いた．オートファジーの誘導には，オートファゴソームと後期エンドソームの融合を抑制するBafilomycin A1存在下に，オートファジー誘導を制御しているmTOR蛋白質の抑制剤であるTorin1を処置することにより行なった．Bafilomycin A1存在下にTorin1を処置することにより，オートファジー誘導のマーカーであるLC3の発現が有意に促進されていることがわかる．Torin1とBafilomycin A1処置Huh7細胞を急速凍結し，細胞のレプリカを電子顕微鏡で観察すると，オートファゴソームの特徴である膜内粒子のない二重膜が多数観察された．抗PtdIns(4)P抗体で標識すると，オートファゴソームの二重膜のうち， 内膜，外膜共に内葉（細胞質側）にPtdIns(4)Pが局在することがわかった．また，オートファゴソームのマーカーであるLC3B, GABARAPL1, GABARAPL2, Rab7との二重標識を行った．LC3B, GABARAPL1, GABARAPL2およびRab7はPtdIns(4)Pと同様にオートファゴソームの外膜，内膜共に内葉に局在が確認できた．しかしながら，予想に反し，PtdIns(4)Pの標識はLC3B，GABALAPL1およびGABALAPL2とは共局在しなかった．これに反し，Rab7の標識はPtdIns(4)Pとオートファゴソーム上で共局在した．Rab7はオートファゴソームの形成の後期に局在することが知られており，PtdIns(4)Pはオートファゴソームの形成後期に発現することが示唆された．
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