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１）ABCA3高発現誘導性アンフィソームの生化学的解析：
これまでに、ABCA3高発現細胞株をMDCK細胞より樹立し、ABCA3高発現でもPVF-tet処理の場合と同様に、抗ウイルス活性を示すアンフィソームが形成されていることを見出した。そこで、ABCA3高発現細胞株より調製したアンフィソームを単離する系の確立を試みた。密度勾配遠心法による分離、さらにフローサイトメトリー(FCM)による濃縮を試み、他のオルガネラと効率よく分離できる条件を決定した。さらに、FCMを用い、ABCA3発現量を指標に分画し、最終的に他のオルガネラをほとんど含まない純度で分画することができた。本画分を用いて、質量分析機による含有リン脂質を分析した。その結果、感染によりPC画分ではdipalmitoyl-PC (16:0-16:0; 32:0)、palmitoyl-stearoyl-PC (16:0-18:0; 34:0)のdi飽和型PCが増加すること、PS画分ではLBには全く存在しないdipalmitoyl-PS (32:0; DPPS)が全PSの50%を占めるまで著増すること、を見出した。本知見は、IAV感染時に細胞が防御的に働く際に、特定のオルガネラでタイナミックな脂質代謝変動が起こっていることを初めて示すものである。
２）PVF-tet誘導性アンフィソームの生化学的解析：
PVF-tet処理によって誘導されるアンフィソームについても、上記と同様の検討を行った。mVenusHA高発現MDCK細胞を用い、IAV感染後PVF-tet処理により産生誘導されるアンフィソームを単離する系を確立した。本系では、mVenusとオートファゴソームマーカーであるLC3とのdouble positive小胞をFCMによって単離することができた。
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