| 研究課題/領域番号 |
17H04035
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
中山 啓子 東北大学, 医学系研究科, 教授 (60294972)
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| 研究分担者 |
城田 松之 東北大学, 医学系研究科, 講師 (00549462)
舟山 亮 東北大学, 医学系研究科, 助教 (20452295)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | ヒストン修飾 / RNAポリメラーゼ / 修飾酵素 / H3K27me3 / H3K36me3 / DRB |
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| 研究実績の概要 |
NIH3T3細胞でSUZ12をノックダウンを行い、それによるノックダウンによる転写の変化について調べた。ヒストンH3K27me3修飾が全ゲノム上で著しく低下している事を確認している。ノックダウン細胞と正常細胞でRNAシークエンスを行い、その結果を比較する事で転写の変化を調べた。
一方で、転写伸長速度を測定するためにRNA ポリメラーゼによる転写の阻害剤であるDRB処理後に、BrU含有培養液で一定時間に新規合成RNA をラベルし、その後にpre-mRNA を回収する。Pre-mRNAから抗BrU抗体を用いてBrUでラベルされているRNA を回収する事で、新規合成RNA を回収した。回収されたRNAをテンプレートとして、遺伝子上に適切な間隔で設計したプライマーを用いてqPCR 法でRNA量を定量する事で、ラベルを行った時間の間にRNA ポリメラーゼが移動した距離を測定する。これまで転写量が非常に多いGAPDH遺伝子をモデル遺伝子として用いてこのアッセイシステムの構築を行ない、転写量の少ないF-box タンパク質である Fbwx1やFbx7、また遺伝子の大きさが大きいNEK１なども調べることが可能であった。
同時にそれぞれの遺伝子のH3K27me3修飾量をプロモーター領域およびGene body で調べるために、抗H3K27me3抗体を用いたCbIP qPCR を行う。それによって、修飾量と転写伸長速度との相関性を調べた。また、NIH3T3細胞でSUZ12をノックダウン細胞でH3K27me3の修飾量を減らした状態でも同様の測定を行い、H3K27me3修飾量が転写伸長速度との相関性があることが示唆された。
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| 現在までの達成度 (段落) |
令和元年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
令和元年度が最終年度であるため、記入しない。
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