| 研究課題/領域番号 |
17H04076
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
飯田 哲也 大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (90221746)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 腸炎ビブリオ / ウェルシュ菌 / 毒素 / 結晶解析 / レセプター |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、腸炎ビブリオおよびBEC産生性ウェルシュ菌の主要な病原因子である VepA(腸炎ビブリオ)およびBEC(ウェルシュ菌)を研究対象とし、それらの活性発現機構を明らかにすることを目的とする。具体的には、まず結晶構造解析により両者の三次元構造を明らかにする。次に明らかになった三次元構造をもとに、一連の変異体を作製して構造機能相関について解析を行い、活性部位等を明らかにする。また、得られた一連の変異体を用い、VepA については V-ATPaseとinteract した結果どのようにリソソーム膜の撹乱を引き起こすかについて、BECに関しては、BECb の腸管上皮細胞への作用がいかに腸管毒性につながるかについて多方面から解析を行い、活性発現機構の解明を目指す。
VepAに関して本年度は、すでに作製している VepA の大量発現系により発現させたVepAを精製し、シッティングドロップ蒸気拡散法により結晶化を試み、結晶のスクリーニングを行った。今のところ高分解能の結晶は得られていない。
BECに関しては、こちらもやはりシッティングドロップ蒸気拡散法により結晶化を試み、BECaおよびBECbともに結晶構造解析を行った。BECaに関しては高分解能の結晶が得られ、構造解析の結果を論文として発表した。BECbについては結晶を作成中である。BECbのレセプターに関しては、BECbの培養細胞に対する結合様式の解析を行った。また、BECbをmonolayerの細胞に作用させた場合の経上皮電気抵抗値(TER)の変化を解析した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
BECaについては、すでに結晶解析が完了し、成果を論文として発表することができた。VepAとBECbに関しては結晶解析を行っているが未だ高分解能の結晶は得られておらず、スクリーニングを継続している。このため、site-directed mutagenesisやerror-prone PCRを用いた構造機能相関についての実験は遅れている。一方で、BECbの標的細胞への結合様式についての知見が得られたのは大きな進捗である。また、翌年度に計画していたBECbのmonolayerの細胞に作用させた場合の経上皮電気抵抗値(TER)の変化についての成績が得られたのは予想を上回る成果であった。
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| 今後の研究の推進方策 |
VepAとBECbに関しては結晶解析を継続する。当初計画通り研究を進めて行くが、特に知見が集積しつつあるBECについてまず集中的に研究を遂行していく予定である。
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