| 研究課題/領域番号 |
17H04127
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| 研究機関 | 愛知医科大学 |
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研究代表者 |
菊地 正悟 愛知医科大学, 医学部, 教授 (40224901)
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| 研究分担者 |
神谷 茂 杏林大学, 医学部, 教授 (10177587)
上野 誠 地方独立行政法人神奈川県立病院機構神奈川県立がんセンター(臨床研究所), その他部局等, その他 (10520760)
笹平 直樹 公益財団法人がん研究会, 有明病院 肝・胆・膵内科, 部長 (30401102)
大崎 敬子 杏林大学, 医学部, 助手 (90255406)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 抗体の交差反応性 / モノクローナル抗体 / PCRベースダイレクトシーケンス / 胆汁 / ERCP / H. pylori 非感染者 |
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| 研究実績の概要 |
1) 血清H. hepaticus抗体価をHRII51モノクローナル抗体を用いて測定した。 胆道癌症例0.45±0.34（N=388）では対照0.39±0.24 （N=545)より高値（P=0.003）、 膵臓癌症例は対照より低値（0.33±0.16）だった。
2) Helicobacter属同士の抗体の交差反応の影響を除くため、H. pylori非感染者の血清でH. hepaticus, H. bilis全菌体抗原ELISAを行った。膵臓癌120症例中H. hepaticus抗体保有2例、H. bilis抗体保有9例、胆道癌130例中H. hepaticus抗体保有8例、H. bilis抗体保有19例が示された。非癌患者血清では117例中、H. hepaticus抗体保有1例、H. bilis抗体保有10例であった。胆道癌患者のH. hepaticus抗体、H. bilis抗体保有率が有意に非癌患者より高かった。
3) 胆道癌、25例、膵臓癌35例、対照者(胆石、胆管炎)の血清で全菌体抗原EIAを行った。胆道癌ではH. hepaticus抗体8例、H. bilis抗体8例、膵臓癌ではH. hepaticus抗体15例、H. bilis抗体17例が陽性であった。
4) ERCP施行時に採取した胆汁（-80℃で保存後測定）で、直接法および、増菌培養後に総DNAを抽出し、PCRベースダイレクトシーケンスによるHelicobacter 属細菌の検出を行った。胆道癌、25例中、H. bilis DNA 2例、H. hepaticusDNA 1例、膵臓癌35例中 H. bilis DNA 2例、H. hepaticus DNA 2例、H. pylori DNA 2例が検出された。非癌症例(11例)ではH. bilis DNA 2例が検出された。
5) 胆道癌25例、膵臓癌35例、対照者(胆石、胆管炎)の血清で全菌体抗原EIAを実施した。胆道癌ではH. hepaticus抗体保有8例、H. bilis抗体保有8例、膵臓癌ではH. hepaticus抗体保有15例、H. bilis抗体保有17例であった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
胆汁からのHelicobacter属細菌の培養を試みているが、未だ成功していない。ブラシを使用した症例の胆汁や、できるだけ新鮮なうちに培地に移すなどの方法を試みている。他の症例収集などは順調であるが、この部分が予定より遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
本研究では検体収集はほぼ計画を達成できたので、検体の測定系の確立を進めてHelicobacter属感染と膵癌、胆道癌との関係を明らかにする。1) 一部の患者について胆管擦過細胞診後の残余検体を使って、培養を試みたが、Eikenella corrodens, Lactobacillus sp. などの細菌の他、腸内細菌科の細菌が培養され、Helicobacter属細菌は検出されなかった。今後は胆管擦過細胞診後の残余検体の輸送を翌日から当日中に輸送できるように事前に打ち合わせを行う体制を整え、さらに選択培地を改良して、Lactobacillusの増殖を抑えて、Helicobacter属細菌の分離培養を行う。
2) 2015年から2017年に収集した血清についてHRII51モノクローナル抗体を用いたによるサンドイッチELISA法を実施する。
3) PCR法により、Helicobacter 属細菌DNAが検出され、抗Helicobacter属抗体価および HRII51抗体価の高い患者の血清を使って、ウエスタンブロッティング解析を行い、患者血清が反応する抗原を探索する。
4) PCR法により、Helicobacter 属細菌DNAが検出され、抗Helicobacter属抗体価および HRII51抗体価の高い患者の血清を使って、ウエスタンブロッティング解析を行い、患者血清が反応する抗原を探索する。
5) 未測定の血清47本、胆汁は6本ある。それらのサンプルについても同様の解析を実施する予定となっている。
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