マウス肝線維化を抑制する新規インテグリン抗体の作用機序と治療応用への集大成研究

2018 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17H04161
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 横崎 恭之 広島大学, 保健管理センター, 准教授 (80210607)
• 研究分担者: 茶山 一彰 広島大学, 医歯薬保健学研究科(医), 教授 (00211376) ; 西道 教尚 広島大学, 保健管理センター, 研究員 (00583486) ; 仙谷 和弘 広島大学, 医歯薬保健学研究科(医), 講師 (30508164)
• 研究期間 (年度): 2017-04-01 – 2020-03-31
• キーワード: 線維化 / インテグリンα8β1 / TGFβ / 肝線維化

研究実績の概要

1. アロステリック型抗体の優位性: 我々が作製したα8阻害抗体のうち、YZ3が競合型、YZ5がアロステリック型であることがわかった。細胞接着アッセイにおける細胞デタッチメント、固相化リガンドに結合したインテグリンに対する抗体添加による解離から判断した。今後、標識Fab抗体を用いて、dose-responseカーブを描き、生化学的に阻害様式を確かめる。
2. α8β1-signalとTGF-βの協調的作用作用:コラーゲンゲルの収縮作用を指標として、α8β1-signaがTGFβと協調的に作用するかを確かめた。α8β1のリガンドであるネフロネクチンを含むゲルを作製したが、肺線維芽細胞による収縮効果を観察したところ、TGFβによる収縮増強はネフロネクチン非含有ゲルに比べ著明に増強した。またこの増強はα8阻害抗体により減弱した。以上から、TGFβはα8β1-signalと協調的に収縮力を高めることが分かった。しかし、これは二つのシグナルが独立したものか否かを判定するには至っていない。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

当該年度の目的であった抗体の作用様式、TGFβとの協調作用を明らかにすることができた。

今後の研究の推進方策

これまでの成果の証拠固めを行う。交代作用様式に関しては、1) タンパク相互作用を細胞を使わない系で検出(Surface plasmon resonance)で検出 2)生化学的に阻害が競合型かアロステリック型かを, 抗体添加によるdose response curveの変化によ り決定する。TGFとの協調作用については、 TGF受容体の阻害剤やα8β1シグナル経路の阻害剤を用いて確認する。

研究成果

• [国際共同研究] UCSF(米国)
  • 国名: 米国
  • 外国機関名: UCSF
• [雑誌論文] Expansion of hedgehog activation disrupts stromal identity and induces emphysema. (2018)
  • 著者名/発表者名: Chaoqun Wang, Nabora Soledad Reyes de Mochel, Stephanie Christenson, Monica Cassandras, Rebecca Moon, Alexis Brumwell, Lauren Byrnes, Alfred Li, Yasuyuki Yokosaki, Peiying Shan, Julie Sneddon, David Jablons, Patty J. Lee, Michael A. Matthay, Harold Chapman, Tien Peng.
  • 雑誌名: J Clin Invest 巻: 128 ページ: 4343-4358
  • DOI: 10.1172/JCI99435
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [学会発表] インテグリンα11β1機能阻害モノクローナル抗体の樹立と活性評価 (2018)
  • 著者名/発表者名: 西道 教尚、伊藤 益美、大谷 水景、横崎 恭之
  • 学会等名: 第41回日本分子生物学会年会
• [学会発表] α-シヌクレインのミクログリア内取り込みはインテグリンα9β1との結合を介したエンドサイトーシスである (2018)
  • 著者名/発表者名: 伊藤 益美、西道 教尚、大谷 水景、原田 真里、横崎 恭之
  • 学会等名: 第41回日本分子生物学会年会
• [学会発表] インテグリン阻害抗体の脱着・解離効果の有無とそのエピトープからの予測, (2018)
  • 著者名/発表者名: 大谷 水景、西道 教尚、伊藤 益美、吉栖 正生、横崎 恭之
  • 学会等名: 第41回日本分子生物学会年会