B系列決定必須転写因子EBF1欠損をレスキューするmicroRNAの発見

2017 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17H04212
• 研究機関: 東海大学
• 研究代表者: 幸谷 愛 東海大学, 医学部, 教授 (00517477)
• 研究分担者: 伊川 友活 国立研究開発法人理化学研究所, 統合生命医科学研究センター, 上級研究員 (60450392) ; 大塚 正人 東海大学, 医学部, 准教授 (90372945) ; 穂積 勝人 東海大学, 医学部, 教授 (30246079)
• 研究期間 (年度): 2017-04-01 – 2020-03-31
• キーワード: B細胞分化

研究実績の概要

B細胞分化に必須な転写因子であるEBF1欠損造血前駆細胞において単一miRNAであるmiR-195がB細胞分化を誘導する詳細な機序を解析することが本研究の目的である。
EBF1欠損マウスはヘテロでしか維持できないため、交配したメスか胎児肝細胞を採取し、ホモのものを選別するという煩雑な手技を要する。また、ホモの発生率が理論値の25％より少なく、時には全く採取されないk十も多いなど効率が非常に悪い状況が
続き、そのことが研究の進展を大きく阻害してきた。そこで、コンディショナルEBF1欠損マウスを研究分担者の伊川研究者より入手し、造血幹細胞でCreリコンビナーゼを発現するVav1－CREマウスを千葉大岩間教授より入手し、それぞれ胚移植が終了し、
交配を開始した。また、miR-195は腫瘍抑制機能を持つため、導入細胞の増殖が抑制され、徐々に細胞数が減少するという問題が存在した。よって、EBF1欠損造血前駆細胞にmiR-195を導入し、骨髄移植した際には、1か月程度しか観察期間が得られなかった。その結果、CD19を発現するB細胞系列決定まではマウス生体内で観察することができたが、その後のB細胞分化が誘導されるか否かをあきらかにすることが不可能であった。この点を克服するために、分担者大塚研究者により、miR-195トランスジェニックマウスが作製された。今後はこのマウスと先にあげたコンディショナルEBF1欠損マウスを交配することにより、EBF1欠損造血細胞にmiR-195を過剰発現した際に、B細胞分化がどこまで進展するのかという点を明らかにできると考えられる。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

平成29年度に予定した、コンディショナルEBF欠損マウスの導入、Vav－Creマウスの導入クリー人ナップ、交配は終了した。miR-195トランスジェニックマウスの作製も終了した。

今後の研究の推進方策

平成29年度の進捗により、今後は安定的にEBF1欠損造血幹細胞を大量に採取することが可能となることが予想される。また、miR-195がEBF1欠損造血前駆細胞にB細胞分化を誘導する機序について、バイオインフォマティクス的手法を駆使し、新たな標的遺伝子を同定した。これらは最終的にB細胞分化に重要な機能を持つ転写因子の活性化に関わるものであるため、みR-195がEBF1欠損下においてB細胞分化を誘導する上で極めて重要な分子群であると考えられる。

研究成果

• [雑誌論文] miRNAs in Normal and Malignant Hematopoiesis (2017)
  • 著者名/発表者名: Ryutaro Kotaki, Ryo Koyama-Nasu, Natsuko Yamakawa, Ai Kotani
  • 雑誌名: International Journal of Molecular Sciences 巻: 18(7) ページ: 1495
  • DOI: 10.3390/ijms18071495
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] A single miRNA complements transcription factor deficiency through the TGF pathway at time of B-cell lineage determination (2017)
  • 著者名/発表者名: Ryutaro Kotaki, Ai Kotani
  • 雑誌名: Rinsho Ketsueki 巻: 58(7) ページ: 792-797
  • DOI: 10.11406/rinketsu.58.792
  • 査読あり
• [雑誌論文] Imbalanced expression of polycistronic miRNA in acute myeloid leukemia (2017)
  • 著者名/発表者名: Ryutaro Kotaki, Hiroshi Higuchi, Daisuke Ogiya, Yasuhiro Katahira, Natsumi Kurosaki, Naoko Yukihira, Jun Ogata, Haruna Yamamoto, Syakira Mohamad Alba, Azran Azhim, Tatsuo Kitajima, Shigeaki Inoue, Kazuhiro Morishita, Koh Ono, Ryo Koyama-Nasu, Ai Kotani
  • 雑誌名: International Journal of Hematology 巻: 106(6) ページ: 811-819
  • DOI: 10.1007/s12185-017-2314-1
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [学会発表] EBV 感染腫瘍由来エクソソームはマクロファージを制御し腫瘍形成を促す (2017)
  • 著者名/発表者名: 幸谷 愛
  • 学会等名: 2017年度生命科学系学会合同年次大会 (ConBio2017)
  • 招待講演
• [学会発表] Ibrutinib As a Possible Therapeutic Strategy for Epstein-Barr Virus-Positive Lymphoma/Leukemia (2017)
  • 著者名/発表者名: Ryutaro Kotaki, Hiroshi Higuchi, Ai Kotani
  • 学会等名: 第59回アメリカ血液学会学術集会
• [学会発表] The Humanized EBV-LPD Recaptilates Human Non GC DLBCL (2017)
  • 著者名/発表者名: Ryo Koike, Joaquim Carreras, Hiroshi Higuchi, Kenichi Imai, Ai Kotani
  • 学会等名: 第59回アメリカ血液学会学術集会
• [備考] 幸谷研究室
  • URL: http://k-lab.jp/index.html