| 研究課題/領域番号 |
17H04278
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| 研究機関 | 地方独立行政法人神奈川県立病院機構神奈川県立がんセンター(臨床研究所) |
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研究代表者 |
笹田 哲朗 地方独立行政法人神奈川県立病院機構神奈川県立がんセンター(臨床研究所), がんワクチンセンター, 部長 (70293967)
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| 研究分担者 |
岸 裕幸 富山大学, 大学院医学薬学研究部(医学), 准教授 (60186210)
東 公一 久留米大学, 医学部, 助教 (00368896)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | ネオアンチゲン / 腫瘍免疫 / 遺伝子変異 / 免疫反応 / 免疫療法 / 個別化治療 / ゼノグラフト |
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| 研究実績の概要 |
（１）TCR遺伝子導入Ｔ細胞を用いたネオアンチゲンスクリーニング系の確立
各種Ｔ細胞表面分子（PD-1, TIM-3, 4-1BB）を発現するＴ細胞群と発現しないＴ細胞群とをsingle cell sorting（90 well）し、各々のＴ細胞クローンの発現するＴ細胞受容体（TCR）遺伝子配列を同定した。大腸がん（2例）、腎臓がん（3例）組織由来の腫瘍浸潤Ｔ細胞を用いて検討したところ、① PD-1, TIM-3, 4-1BBを発現するＴ細胞群には腫瘍局所で選択的に増加したと思われるＴ細胞クローンがしばしば高頻度に同定されること、② PD-1, TIM-3, 4-1BBを発現するＴ細胞群と発現しないＴ細胞群とを比較したところ、各群間で発現するTCR遺伝子配列が大きく異なること、などが判明した。現在、分離したＴ細胞クローンから同定したTCR遺伝子を導入したＴ細胞株を作成中である。今後、多数のTCR遺伝子導入Ｔ細胞株のネオアンチゲン反応性（サイトカイン分泌など）を比較・検討することにより、Ｔ細胞クローンの分離頻度の高低とネオアンチゲン反応性の有無との相関を検証する予定である。
（２）ゼノグラフトモデルの樹立
大腸がん5例、腎臓がん10例に由来するがん組織をNSGマウスに移植したところ、現在までに大腸がん2例、腎臓がん1例のゼノグラフトモデルが樹立された。今後、樹立されたゼノグラフトモデルに、同一患者において同定されたTCR遺伝子を導入したT細胞株を移入することにより抗腫瘍効果を検証する予定である。
（３）抗PD-1抗体で治療された非小細胞肺がん患者10例（有効例、無効例を各5例）から末梢血、腫瘍組織を採取し保存した。今後、分離したＴ細胞クローンからTCR遺伝子配列を同定し、ネオアンチゲン反応性を確認する予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度の成果として、各種Ｔ細胞表面分子（PD-1, TIM-3, 4-1BB）をマーカーとして用いることにより、大腸がん、腎臓がん患者由来がん組織から腫瘍局所で選択的に増加したと思われるＴ細胞クローンを効率よく分離できることを明らかとした。また、現在までに大腸がん2例、腎臓がん1例のゼノグラフトモデルが樹立されており、おおむね順調に進展していると考える。
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| 今後の研究の推進方策 |
（１）大腸がん、腎臓がん組織由来Ｔ細胞クローンから同定したTCR遺伝子を導入したＴ細胞株を用いて、ネオアンチゲン反応性を確認する予定である。なお、Ｔ細胞クローンの分離頻度の高低とネオアンチゲン反応性の有無とが相関するかどうかを、多数のTCR遺伝子導入Ｔ細胞株を用いて検討する。また、大腸がん・腎臓がんの組織検体数を増やして、選択的・効率的なネオアンチゲン特異的Ｔ細胞の分離法をさらに検証する。
（２）樹立されたゼノグラフトモデルに、同一患者において同定されたTCR遺伝子を導入したＴ細胞株を移入することにより抗腫瘍効果を検証する。なお、大腸がん、腎臓がん由来がん組織ではゼノグラフトモデルの樹立効率が悪いため、移植腫瘍組織数（患者数）をさらに増やして、ゼノグラフトモデル作成を継続する。
（３）抗PD-1抗体で治療された非小細胞肺がん患者10例（有効例、無効例を各5例）から末梢血、腫瘍組織を採取し保存する。今後、分離したＴ細胞クローンからTCR遺伝子配列を同定し、ネオアンチゲン反応性を確認する予定である。
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