| 研究課題/領域番号 |
17H04649
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| 研究機関 | 大分大学 |
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研究代表者 |
小林 隆志 大分大学, 医学部, 教授 (30380520)
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| 研究分担者 |
濱野 真二郎 長崎大学, 熱帯医学研究所, 教授 (70294915)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | PKDL / バングラデシュ / 診断技術 / 節足動物媒介感染症 / チクングニア熱 / ジカ熱 |
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| 研究実績の概要 |
バングラデシュでは多くの節足動物媒介感染症が問題となっている。致命的な疾患である内臓型リーシュマニア症(VL)は、治療による全身症状寛解後に一部の患者がポスト・カラ・アザール皮膚リーシュマニア症（PKDL）を発症する。VLの制圧には、PKDLの発症機序を理解し、的確に診断・治療することが不可欠である。一方、ウイルスによる節足動物媒介感染症としては、チクングニア熱やジカ熱が問題となっている。これらは、蚊によって媒介され、日本でも輸入症例があり、迅速診断キットの開発が望まれる。
本研究では、バングラデシュにおいて、①VL患者のPKDL発症の原因となるリスクファクターの集積と解析を行い、②新規迅速診断キット（Dry LAMP）の現地での有用性を検証する。また、③チクングニア熱の新規迅速診断キットも開発しその有用性を検証する。④ジカ熱の増悪化因子の探求を行う。これらによりバングラデシュにおける節足動物媒介感染症の予防法・治療法・診断法の開発に応用する。
PKDLのリスクファクターを念頭に置きつつ、不顕性リーシュマニア症の感染率とリスク因子に関するメタ解析を行い、系統的レヴューの執筆を進めた。また、現地での実証試験において安定性が問題となったL. donovaniのDry LAMPの開発では、複数の新たなプライマーを検討した結果、感度と特異性の高いものが見つかり、次年度以降の実証試験に臨む体制が整った。一方、共同研究者の依頼によりチクングニア熱に対するCHIKV-Dry LAMPを開発し、実験室レベルでの試験を重ねた上、感度と特異性の高いものが得られた。さらに、現地での実証試験に臨み良好な結果が得られた。ジカ熱の増悪化因子の解析では、人工ウイルス粒子（SRIPs）を用いてジカウイルスの細胞侵入に必要なエンベロープ内のアミノ酸解析を行い、候補アミノ酸の絞り込みに成功した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
①バングラデシュにおけるPKDL患者の検体を用いて、VL患者のPKDL発症の原因となるリスクファクターの集積と解析を行い、昨年度までにPKDL発症患者群において上昇したmicroRNAを8種類、減少したものを10種類同定した。本年度は、これら18種類のmicroRNAと免疫反応、代謝および細胞内シグナル伝達等の関連の解析を進めた。
②L. donovaniの新規迅速診断キットの開発では、前年にDry LAMPを現地に持ち込んで行った実証試験において長期間保存したキットの安定性が問題となったため、新たにプライマーセットを検討し感度と特異性の高いものが得られた。
③昨年度、共同研究者の依頼を受けチクングニア熱に対する新規診断法としてCHIKV-Dry LAMPの開発に取り組んだ。実験室レベルでの試験を重ねた上、高感度で特異性の高い診断法が開発され、現地での実証試験においても良好な結果が得られたので学術論文の執筆に着手した。
④ジカ熱の増悪化因子の解析では、人工ウイルス粒子（SRIPs）を用いてジカウイルスの細胞侵入に必要なエンベロープ内のアミノ酸解析を行い、候補アミノ酸の絞り込みに成功した。
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| 今後の研究の推進方策 |
①PKDLのリスクファクターについては、昨年度までの研究に引き続き、PKDL患者検体において免疫抑制性因子（IL-10，IL-27，TGF-β、STAT3，Foxp3）、免疫チェックポイント調節分子（CTLA-4，PD-1，SOCS3）、リーシュマニア原虫の定量的検出、末梢血白血球および皮膚パンチ生検中の宿主免疫関連分子の発現解析、血中サイトカイン、血漿および尿検体中の抗原、抗体等の定量、SNP解析を実施し、PKDL発症率との相関を解析し、PKDL発症の成否を規定する分子を特定する。
②L. donovaniの新規迅速診断キットの開発については、前年度に検討した新規プライマーのさらなる条件検討を実験室で行った後、再びバングラデシュでの実証試験を行う。
③CHIKV-Dry LAMPについては、研究論文を作成するとともにバングラデシュの共同研究者と社会実装の検討を進める。
④前年度にジカ熱のprM＋Eを有するSRIPsを構築し、細胞侵入に重要なエンベロープ内のアミノ酸を複数個絞り込んだので、そこから必要不可欠なアミノ酸を同定する。また、ジカ熱が宿主免疫応答に与える影響を解析し増悪化のリスクファクターを明らかにする。
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