| 研究課題/領域番号 |
17H04764
|
|---|
| 研究機関 | 東京大学 |
|---|
研究代表者 |
浅沼 大祐 東京大学, 大学院医学系研究科(医学部), 助教 (10611204)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
|
| キーワード | 生体分子計測 / ケミカルバイオロジー / 蛍光プローブ |
|---|
| 研究実績の概要 |
小分子蛍光プローブは細胞内外の多様な分子の時空間動態を可視化し、動的な細胞現象の直接的な理解に大きく貢献してきた。しかしながら、その応用は培養細胞で多く達成されてきたが、組織や個体での分子動態の解明への貢献は十分に為されていない。本研究では、カルシウムシグナルの可視化を対象として、従来生体応用の際に問題となるプローブの非特異的染色を解消し、なおかつ、生体イメージングに適した近赤外光による分子可視化を実現する革新的な蛍光プローブ・タグ技術の開発を目的とする。近赤外蛍光色素とジニトロフェニル基（DNP）を繋いだテスト化合物を合成して蛍光特性を評価したところ、DNPの付いていない蛍光色素と比較して大きく消光することを確認した。また、これまでに開発した抗DNP一本鎖抗体DeQODEタグと混合したところ、テスト化合物は著しい蛍光増大を示した。タグとの結合により蛍光色素に対するDNPの消光団としての働きが解消されたためだと考えられる。培養細胞における蛍光プローブ・タグの特性を検証する評価系の作製のため、遺伝子導入およびシングルセルクローニングを行い、EGFPとDeQODEタグの融合タンパク質を発現する細胞株を複数取得した。また、目的とするタグ発現細胞におけるカルシウムイオンを特異的に検出するプローブの開発のため、近赤外色素分子と消光団にさらにカルシウムイオンキレーターを導入したプローブのプロトタイプ分子を設計し、計26ステップで合成を完了した。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度に蛍光プローブのプロトタイプを用いた培養細胞における実証試験を計画していたが、完了しなかったため。
|
| 今後の研究の推進方策 |
合成が完了した蛍光プローブのプロトタイプを培養細胞に応用し、特性の評価を行う。それ以降は、有望なプローブ・タグのプロトタイプについて、当初の計画通りに脳切片標本を対象にした組織イメージング応用を図り、技術の最適化を進める。標本内のタグ発現神経細胞におけるカルシウムシグナルを検出可能であることを明らかにする。
|
