血小板・巨核球造血を制御する骨髄微小環境の解明に向けた実験基盤構築

2017 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17H05073
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 田村 彰吾 名古屋大学, 医学系研究科(保健), 助教 (60722626)
• 研究期間 (年度): 2017-04-01 – 2021-03-31
• キーワード: 巨核球 / 骨髄微小環境

研究実績の概要

本研究の目的はBM FRC-like cellが制御する骨髄環境形成機構の解明に向けた実験基盤の構築である。今回、その基盤的知見を得るためにBM FRC-like cellの細胞特性解析として、網羅的遺伝子発現プロファイリングを行った。
野生型マウス（C57BL/6）の大腿骨および脛骨から骨髄を採取し、BM FRC-like cellをFACS AriaIIでソーティングした。比較細胞として、リンパ節FRC (LN FRC)、リンパ管内皮細胞（LEC）と骨髄血管内皮細胞 (BMEC) と骨芽細胞を同様に採取した。網羅的遺伝子発現プロファイリングはGeneChip Mouse Gene 2.0 ST Arrayで行った。
BM FRC-like cellにおいて5倍以上もしくは5倍以下の発現量増減を認めた遺伝子は、LN FRCとの比較で2196遺伝子、LECとの比較で2145遺伝子、BMECとの比較で1131遺伝子であった。興味深いことに、BM FRC-like cellはどの比較細胞に対してもRunx2, Sp7 (Osterix)といった骨芽細胞系転写因子が高発現であった。この知見から、BM FRC-like cellと骨芽細胞との近似性が考えられた。そこでBM FRC-like cellと骨芽細胞との遺伝子発現プロファイルを比較したところ、BM FRC-like cell特異的に発現の増減が認められた遺伝子は1524遺伝子であった。骨芽細胞系転写因子 (Runx2, Sp7) はBM FRC-like cellと骨芽細胞では大きな差は認められなかった。なお、BM FRC-like cellは非造血系細胞であるにも関わらず、今回比較した全ての細胞に比べてHbb-bt が極めて高発現であった。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

H29年度の計画・目標はマイクロアレイを用いた網羅的遺伝子発現プロファイリング解析により、BM FRC-like cell特異的に発現する遺伝子を同定することであった。遺伝子プロファイリングの結果、BM FRC-like cellは骨芽細胞系の特性を保持する骨髄間葉系細胞である可能性が考えられた。また、今回BM FRC-like cell特異的に高発現が認められる遺伝子 (e.g., Hbb-bt)を見出した。以上の結果からH29年度の進捗状況は当初の計画通りであり、おおむね順調な進展であると判断した。

今後の研究の推進方策

BM FRC-like cellのcharacterizationとして骨芽細胞系の特性を保持する骨髄間葉系細胞であることを明らかにし、さらにHbb-btなどのいくつかの特異発現遺伝子の候補を得た。本研究はBM FRC-like cellが制御する骨髄環境形成機構の解明に向けた実験基盤の構築を目的とし、BM FRC-like cell特異的遺伝子改変マウスを作製する。今回候補として挙げられたBM FRC-like cell特異的発現遺伝子はCre-loxpシステムによるBM FRC-like cell特異的コンディショナルKOマウスの作製に応用可能である。今後、BM FRC-like cellの間葉系幹細胞としての機能や特異的発現遺伝子の詳細な解析を重ねたうえで、遺伝子改変マウス作製に着手していく予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Optimisation of antithrombin resistance assay as a practical clinical laboratory test: Development of prothrombin activator using factors Xa/Va and automation of assay (2018)
  • 著者名/発表者名: Tamura S.、Suga Y.、Tanamura M.、Murata-Kawakami M.、Takagi Y.、Hottori Y.、Kakihara M.、Suzuki S.、Takagi A.、Kojima T.
  • 雑誌名: International Journal of Laboratory Hematology 巻: 40 ページ: 312～319
  • DOI: 10.1111/ijlh.12786
  • 査読あり
• [雑誌論文] 巨核球造血の微小環境 (2017)
  • 著者名/発表者名: 田村彰吾、井上克枝、小嶋哲人
  • 雑誌名: 血液フロンティア 巻: 27 ページ: 37-46
• [雑誌論文] ASK1 facilitates tumor metastasis through phosphorylation of an ADP receptor P2Y12 in platelets (2017)
  • 著者名/発表者名: Kamiyama Miki、Shirai Toshiaki、Tamura Shogo、Suzuki-Inoue Katsue、Ehata Shogo、Takahashi Kei、Miyazono Kohei、Hayakawa Yoshihiro、Sato Takehiro、Takeda Kohsuke、Naguro Isao、Ichijo Hidenori
  • 雑誌名: Cell Death and Differentiation 巻: 24 ページ: 2066～2076
  • DOI: 10.1038/cdd.2017.114
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vitro exploration of latent prothrombin mutants conveying antithrombin resistance (2017)
  • 著者名/発表者名: Tamura Shogo、Murata-Kawakami Moe、Takagi Yuki、Suzuki Sachiko、Katsumi Akira、Takagi Akira、Kojima Tetsuhito
  • 雑誌名: Thrombosis Research 巻: 159 ページ: 33～38
  • DOI: 10.1016/j.thromres.2017.09.020
  • 査読あり
• [雑誌論文] Combined deficiency of factors V and VIII by chance coinheritance of parahaemophilia and haemophilia A, but not by mutations of either LMAN1 or MCFD2, in a Japanese family (2017)
  • 著者名/発表者名: Suzuki S.、Nakamura Y.、Suzuki N.、Yamazaki T.、Takagi Y.、Tamura S.、Takagi A.、Kanematsu T.、Matsushita T.、Kojima T.
  • 雑誌名: Haemophilia 巻: 24 ページ: e13～e16
  • DOI: 10.1111/hae.13360
  • 査読あり
• [学会発表] Antithrombin resisitance検査法の改良：Bovine FXa/Va prothrombin activatorシステムの構築と血液凝固分析装置適応条件の検討 (2018)
  • 著者名/発表者名: 田村彰吾、川上萌 、垣原美紗樹、服部有那、鈴木幸子、高木夕希、高木明、小嶋哲人
  • 学会等名: 第12回日本血栓止血学会学術標準化委員会（SSC）シンポジウム
  • 招待講演
• [学会発表] A novel role of platelet-expressed C-type lectin-like receptor 2 (CLEC-2) in erythropoiesis (2017)
  • 著者名/発表者名: S. Otake, T. Shirai, N. Tsukiji, T. Sasaki, S. Tamura, K. Satoh, Y. Ozaki, K. Suzuki-Inoue
  • 学会等名: 第79回日本血液学会学術集会
• [学会発表] 最近10年間の名古屋大学におけるPROS1変異解析データ (2017)
  • 著者名/発表者名: 服部有那、垣原美紗樹、坂根寛人、藤岡亮也、橋本恵梨華、槇山愛弓、鈴木幸子、髙木夕希、田村彰吾、高木明、兼松毅、鈴木伸明、松下正、小嶋哲人
  • 学会等名: 第79回日本血液学会学術集会
• [学会発表] Inv22 の逆位型 および健常型ゲノム構造 が同時に検出された重症血友病 A 症例 (2017)
  • 著者名/発表者名: 垣原美紗樹, 田村彰吾, 服部有那, 坂根寛人, 橋本恵梨華, 藤岡亮也, 槇山愛弓, 河村奈美, 鈴木幸子, 高木夕希, 高木明, 小川実加, 松下正, 小嶋哲人
  • 学会等名: 第39回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 新規変異ITGA2B p.Cys198Serを含む複合ヘテロ変異をもつ血小板無力症の一例 (2017)
  • 著者名/発表者名: 橋本恵梨華、高木夕希、鈴木幸子、河村奈美、槇山愛弓、坂根寛人、藤岡亮也、田村彰吾、高木明、上原貴博、國島伸治、小嶋哲人
  • 学会等名: 第39回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 血友病Bにおける血液凝固第Ⅸ因子遺伝子変異とインヒビターの関連性の検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 坂根 寛人, 田村彰吾, 橋本 恵梨華, 藤岡 亮也, 槇山 愛弓, 河村 奈美, 鈴木 幸子, 木 夕希, 高木 明, 兼松 毅, 岸本 磨由子, 小川 実加, 鈴木 伸明, 松下 正, 矢田 弘史, 嶋 緑倫, 小嶋 哲人
  • 学会等名: 第39回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 血友病患者の出欠頻度と相関する因子の検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 小川実加、鈴木伸明、鈴木敦夫、垣原美紗樹、村田萌、田村彰吾、兼松毅、岸本磨由子、小嶋哲人、清井仁、松下正
  • 学会等名: 第39回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 血友病B症例におけるF9全欠失を伴うX染色体の複雑な遺伝子再構成の遺伝子解析 (2017)
  • 著者名/発表者名: 槇山愛弓、田村彰吾、橋本恵梨華、高木夕希、河村奈美、鈴木幸子、坂根寛人、藤岡亮也、高木明、小嶋哲人
  • 学会等名: 第39回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] アンチトロンビン抵抗性はトロンビン生成試験（TGA）により検出可能か (2017)
  • 著者名/発表者名: 髙木夕希、鈴木幸子、河村奈美、槇山愛弓、坂根寛人、橋本恵梨華、藤岡亮也、田村彰吾、高木明、小嶋哲人
  • 学会等名: 第39回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] アンチトロンビン抵抗性凝固第Xa因子検出法の開発 (2017)
  • 著者名/発表者名: 藤岡亮也、中田悠紀子、坂根寛人、橋本恵梨華、河村奈美、槇山愛弓、鈴木幸子、髙木夕希、田村彰吾、高木明、小嶋哲人
  • 学会等名: 第39回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] フィブリノゲン低下症3症例における遺伝子解析 (2017)
  • 著者名/発表者名: 服部有那、垣原美紗樹、髙木夕希、鈴木幸子、槇山愛弓、河村奈美、橋本恵梨華、坂根寛人、藤岡亮也、田村彰吾、高木明、岸本磨由子、鈴木伸明、松下正、小嶋哲人
  • 学会等名: 第39回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 血友病A患者における血液凝固第VIII因子の遺伝子解析 (2017)
  • 著者名/発表者名: 鈴木幸子、髙木夕希、河村奈美、槇山愛弓、橋本恵梨華、坂根寛人、藤岡亮也、垣原美紗樹、服部有那、田村彰吾、高木明、小川実加、兼松毅、岸本磨由子、鈴木伸明、松下正、
  • 学会等名: 第39回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 活性化プロテインC抵抗性（Activated Protein C Resistance: APCR）と参加関連静脈血栓症 (2017)
  • 著者名/発表者名: 鈴木幸子、兼松毅、岸本磨由子、髙木夕希、河村奈美、槇山愛弓、橋本恵梨華、坂根寛人、藤岡亮也、田村彰吾、高木明、小川実加、津田弘之、小谷友美、鈴木伸明、小嶋哲人、松下正
  • 学会等名: 第39回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 血小板によるCLEC-2-Podoplaninシグナルを介した新たな肺胞形成メカニズム (2017)
  • 著者名/発表者名: 築地長治、井上修、辰巳徳史、岡部正隆、森本充、植田康司、平島正則、佐々木知幸、白井俊光、田村彰吾、大竹志門、佐藤金夫、尾崎由基男、井上克枝
  • 学会等名: 第39回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 関節リウマチにおける血小板受容体CLEC-2の役割 (2017)
  • 著者名/発表者名: 佐々木知幸、白井俊光、築地長治、小山賢介、田村彰吾、大竹志門、長田誠、佐藤金夫、波呂浩孝、尾崎由基男、井上克枝
  • 学会等名: 第39回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 新規大欠失症例を含む先天性アンチトロンビン欠乏症のSERPINC1解析 (2017)
  • 著者名/発表者名: 橋本恵梨華、髙木夕希、鈴木幸子、坂根寛人、田村彰吾、高木明、金子誠、勝見章、松下正、小嶋哲人
  • 学会等名: 第18回日本検査血液学会学術集会
• [学会発表] Platelet Activation by CLEC-2-Podoplanin Interaction is Essential for Lung Development (2017)
  • 著者名/発表者名: N. Tsukiji, O. Inoue, T. Shirai, S. Tamura, S. Otake, T. Sasaki, K. Satoh, Y. Ozaki, K. Suzuki-Inoue
  • 学会等名: ISTH2017
  • 国際学会
• [学会発表] Unusual Genomic Rearrangement Combined with Inv22 and Wild-type X-chromosome in Severe Hemophilia A Patients (2017)
  • 著者名/発表者名: S. Tamura, M. Kakihara, Y. Hattori, E. Hashimoto, H. Sakane, Y. Takagi, M. Ogawa, T. Kanematsu, N. Suzuki, A. Takagi, T. Matsushita, T. Kojima
  • 学会等名: ISTH2017
  • 国際学会
• [学会発表] The first assessment of F9 mutation associated with inhibitor development in Japanese hemophilia B patients (2017)
  • 著者名/発表者名: Hiroto Sakane, Shogo Tamura, Erika Hashimoto, Akiya Fujioka, Ayumi Makiyama, Nami Kawamura, Sachiko Suzuki, Yuki Takagi, Tsuyoshi Kanematsu, Mayuko Kishimoto, Mika Ogawa, Nobuaki Suzuki, Tadashi Matsushita, Hiroshi Yada, Midori Shima, Tetsuhito Kojima
  • 学会等名: ISTH2017
  • 国際学会
• [学会発表] Thrombin Generation Assay CANNOT Identify Antithrombin Resistance During Anticoagulant Therapy (2017)
  • 著者名/発表者名: Y. Takagi, S. Suzuki, N. Kawamura, A. Makiyama, H. Sakane, E. Hashimoto, A. Fujioka, S. Tamura, A. Takagi, V. Djordjevic, T. Kojima
  • 学会等名: ISTH2017
  • 国際学会
• [学会発表] Compound Heterozygosity for Mutations in ITGA2B Including a Novel p.Cys198Ser in Glanzmann Thrombasthenia (2017)
  • 著者名/発表者名: E. Hashimoto, S. Kunishima, Y. Takagi, S. Suzuki, N. Kawamura, A. Makiyama, H. Sakane, A. Fujioka, T. Uehara, S. Tamura, A. Takagi, T. Kojima
  • 学会等名: ISTH2017
  • 国際学会
• [学会発表] An Inhibitory Mutant of Snake Venom Rhodocytin Blocks CLEC-2/Podoplanin Interaction-dependent Platelet Aggregation and Experimental Lung Metastasis (2017)
  • 著者名/発表者名: T. Sasaki, T. Shirai, N. Tsukiji, S. Otake, S. Tamura, M. Osada, K. Satoh, Y. Ozaki, K. Suzuki-Inoue
  • 学会等名: ISTH2017
  • 国際学会
• [学会発表] C-Type Lectin-like Receptor 2 Promotes Hematogenous Tumor Metastasis and Prothrombotic State in Tumor-bearing Mice (2017)
  • 著者名/発表者名: T. Shirai, O. Inoue, S. Tamura, N. Tsukiji, T. Sasaki1, H. Endo, K. Satoh, M. Osada, H. Sato-Uchida, H. Fujii, Y. Ozaki, K. Suzuki-Inoue
  • 学会等名: ISTH2017
  • 国際学会
• [備考] 名古屋大学大学院医学系研究科 病態解析学講座 血液・遺伝子研究室
  • URL: http://square.umin.ac.jp/bloodlab/Hematol_%26_Gene_Res_Lab/Welcome.html