血小板・巨核球造血を制御する骨髄微小環境の解明に向けた実験基盤構築

2018 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17H05073
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 田村 彰吾 名古屋大学, 医学系研究科(保健), 助教 (60722626)
• 研究期間 (年度): 2017-04-01 – 2021-03-31
• キーワード: 巨核球 / 微小環境

研究実績の概要

H30年度は前年度の研究に引き続き申請者らが同定した骨髄巨核球造血微小環境を構成するPDPN陽性間質細胞（BM FRC-like cellとして報告）の細胞学的特性解析を行った。PDPN陽性間質細胞の骨芽細胞、脂肪細胞、軟骨細胞への分化誘導実験の結果、PDPN陽性間質細胞は近年報告された新しい間葉系幹細胞の一種であるskeltal stem cellもしくはその分化系譜に位置する細胞に近い間質系細胞であるという知見が得られた。
また、H30年度はPDPN陽性間質細胞のより詳細な分離技術を確立することができた。これまでにPDPN陽性間質細胞の分子生物学的特性解析として遺伝子プロファイリング解析を行い、骨芽細胞と近い特性を持つことが明らかになっていたが、新たに得た知見および確立した技術を駆使し、改めてskeltal stem cellおよびその系譜の細胞とPDPN陽性間質細胞の遺伝子プロファイリングを行なうことでより詳細なPDPN陽性間質細胞の細胞学的および分子生物学的特性が明らかになると予想される。
これまでの研究成果により、全く不明であったPDPN陽性間質細胞の細胞起源について仮説が立てられる段階になった。今後は組織学的および分子生物学的手法を駆使してPDPN陽性間質細胞の細胞起源を解明し、個体が骨髄内で巨核球造血微小環境を構成するメカニズムの解明へと発展させていく。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

当初の計画どおりにPDPN陽性間質細胞の遺伝子遺伝子プロファイリングと細胞学的な分化誘導実験を行い、PDPN陽性間質細胞の特性の一端が明らかになりつつある。その知見にはPDPN陽性間質細胞特異的もしくはPDPN陽性間質細胞を含む間葉系細胞系譜特異的な遺伝子改変のターゲットとなりうる候補遺伝子も挙がってきているため、概ね順調に進展しているとの評価とした。

今後の研究の推進方策

これまでに実施したPDPN陽性間質細胞とリンパ管FRC、リンパ管内皮細胞、骨髄血管内皮細胞、骨芽細胞との遺伝子発現プロファイリングに加えて、skeltal stem cellとその分化系譜細胞とのプロファイリングを行なう。また、これまでの結果からPDPN陽性間質細胞特異的もしくはPDPN陽性間質細胞を含む間葉系細胞系譜特異的な遺伝子改変のターゲットとなりうる候補遺伝子が挙がっており、特異遺伝子Cre発現マウスを導入してCre誘導性EGFP発現マウスと交配することでPDPN陽性間質細胞特異的EGFP発現マウスを作出する。作出したPDPN陽性間質細胞レポーターマウスは骨髄の組織学的検討やFACSを用いた細胞学的検討でPDPN陽性間質細胞の細胞期限の探索を進める。

研究成果

• [雑誌論文] Podoplanin-positive periarteriolar stromal cells promote megakaryocyte growth and proplatelet formation in mice by CLEC-2 (2018)
  • 著者名/発表者名: TAMURA Shogo
  • 雑誌名: Japanese Journal of Thrombosis and Hemostasis 巻: 29 ページ: 389～397
  • DOI: https://doi.org/10.2491/jjsth.29.389
  • 査読あり
• [雑誌論文] Platelets play an essential role in murine lung development through Clec-2/podoplanin interaction (2018)
  • 著者名/発表者名: Tsukiji Nagaharu、Inoue Osamu、Morimoto Mitsuru、Tatsumi Norifumi、Nagatomo Hiroaki、Ueta Koji、Shirai Toshiaki、Sasaki Tomoyuki、Otake Shimon、Tamura Shogo、Tachibana Toshiaki、Okabe Masataka、Hirashima Masanori、Ozaki Yukio、Suzuki-Inoue Katsue
  • 雑誌名: Blood 巻: 132 ページ: 1167～1179
  • DOI: 10.1182/blood-2017-12-823369
  • 査読あり
• [雑誌論文] Functional characterization of recombinant snake venom rhodocytin: rhodocytin mutant blocks CLEC-2/podoplanin-dependent platelet aggregation and lung metastasis (2018)
  • 著者名/発表者名: Sasaki T.、Shirai T.、Tsukiji N.、Otake S.、Tamura S.、Ichikawa J.、Osada M.、Satoh K.、Ozaki Y.、Suzuki-Inoue K.
  • 雑誌名: Journal of Thrombosis and Haemostasis 巻: 16 ページ: 960～972
  • DOI: 10.1111/jth.13987
  • 査読あり
• [雑誌論文] Optimisation of antithrombin resistance assay as a practical clinical laboratory test: Development of prothrombin activator using factors Xa/Va and automation of assay (2018)
  • 著者名/発表者名: Tamura S.、Suga Y.、Tanamura M.、Murata-Kawakami M.、Takagi Y.、Hottori Y.、Kakihara M.、Suzuki S.、Takagi A.、Kojima T.
  • 雑誌名: International Journal of Laboratory Hematology 巻: 40 ページ: 312～319
  • DOI: 10.1111/ijlh.12786
  • 査読あり
• [学会発表] トロンビンNa binding regionのミスセンス変異は多くがアンチトロンビン抵抗性を示すが、凝固活性も低下する (2019)
  • 著者名/発表者名: 田村彰吾、川上萌、勝見章、高木明、早川文彦 、小嶋哲人
  • 学会等名: 第13回日本血栓止血学会学術標準化委員会（SSC）シンポジウム
• [学会発表] Peri-arteriolar megakaryopoietic microenvironment via reciprocal CLEC-2/PDPN axis in mouse bone marrow (2018)
  • 著者名/発表者名: Shogo Tamura, Katsue Suzuki-Inoue, Yukio Ozaki, Tetsuhito Kojima
  • 学会等名: 第80回日本血液学会学術集会
  • 招待講演
• [学会発表] スプライシング異常を引き起こす血液凝固第IX遺伝子サイレント変異・血友病Bの分子病態解析 (2018)
  • 著者名/発表者名: 大平晃也、田村彰吾、坂根寛人、所 真昼、垣原美紗樹、服部有那、橋本恵梨華、鈴木幸子、高木夕希、高木明、兼松毅、岸本磨由子、鈴木伸明、松下正、小嶋哲人
  • 学会等名: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] F8 Inv22を含む複雑な変異を同定した重症血友病A症例の遺伝学的変異アレル由来の検索 (2018)
  • 著者名/発表者名: 垣原美紗樹、田村彰吾、服部有那、高木夕希、鈴木幸子、橋本恵梨華、坂根寛人、大平晃也、所真昼、高木明、小川実加、兼松毅、鈴木伸明、松下正、小嶋哲人
  • 学会等名: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 脳梗塞の増悪因子であるアクロレインの抗血小板作用 (2018)
  • 著者名/発表者名: 梅谷徳彦、白井俊光、築地長治、佐々木知幸、田村彰吾、佐藤金夫、大竹志門、高野勝弘、横道洋司、尾崎由基男、井上克枝
  • 学会等名: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 脳梗塞を発症したフィブリノゲン異常症の分子病態機能解析 (2018)
  • 著者名/発表者名: 服部有那、垣原美紗樹、高木夕希、鈴木幸子、橋本恵梨華、坂根寛人、田村彰吾、高木明、松下正、小嶋哲人
  • 学会等名: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 血友病Aにおいて関節症の進行抑制には出血抑制よりも高いFVIII活性が必要である (2018)
  • 著者名/発表者名: 鈴木伸明、鈴木敦夫、高橋伸典、田村彰吾、兼松毅、高木明、小嶋俊久、清井仁、小嶋哲人、石黒直樹、松下正
  • 学会等名: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 血小板・巨核球上のC型レクチン様受容体（CLEC-2）が、赤芽球の分化・成熟に及ぼす役割 (2018)
  • 著者名/発表者名: 大竹志門、白井俊光、築地長治、佐々木知幸、田村彰吾、佐藤金夫、尾崎由基男、井上克枝
  • 学会等名: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 血小板受容体GPVIアゴニスト蛇毒今バル寄進の遺伝子組換え体の作製とその機能解析 (2018)
  • 著者名/発表者名: 佐々木知幸、白井俊光、築地長治、大竹志門、田村彰吾、長田誠、佐藤金夫、尾崎由基男、井上克枝
  • 学会等名: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 血液凝固第V因子欠乏症を合併する血友病A症例：第２報・凝血学的評価 (2018)
  • 著者名/発表者名: 鈴木幸子、髙木夕希、坂根寛人、橋本恵梨華、垣原美紗樹、服部有那、大平晃也、所真昼、田村彰吾、高木明、鈴木敦夫、鈴木伸明、松下正、山崎鶴夫、小嶋哲人
  • 学会等名: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 凝固一段法と合成基質法による第VIII因子活性測定において乖離を示した血友病A症例 (2018)
  • 著者名/発表者名: 鈴木敦夫、鈴木伸明、兼松毅、岸本磨由子、田村彰吾、高木明、川上萌、梶浦容子、小嶋哲人、松下正
  • 学会等名: 第40回日本血栓止血学会学術集会
• [学会発表] 血漿検体測定を目指したアンチトロンビン抵抗性凝固第X因子検出法の構築 (2018)
  • 著者名/発表者名: 田村彰吾、藤岡亮也、服部有那、垣原美紗樹、鈴木幸子、高木夕希、高木明、小嶋哲人
  • 学会等名: 第19回日本検査血液学会学術集会
• [学会発表] Haploid origin of unusual Inv22 X-chromosome carrying wild-type telomere region in severe hemophilia A patients (2018)
  • 著者名/発表者名: Misaki Kakihara, Shogo Tamura, Yuna Hattori, Sachiko Suzuki, Koya Odaira, Mahiru Tokoro, Takeshi Kanematsu, Nobuaki Suzuki, Tadashi Matsushita, Tetsuhito Kojima
  • 学会等名: APSTH2018
  • 招待講演
• [学会発表] Functional analysis of a variant fibrinogen from dysfibrinogenemia patient with cerebral infarction (2018)
  • 著者名/発表者名: Hattori Y, Takagi Y, Kakihara M, Suzuki S, Odaira K, Tokoro M, Tamura S, Suzuki N, Matushita T, Kojima T
  • 学会等名: APSTH2018
  • 招待講演
• [備考] 名古屋大学大学院医学系研究科 病態解析学講座 血液・遺伝子研究室
  • URL: http://square.umin.ac.jp/bloodlab/Hematol_%26_Gene_Res_Lab/Welcome.html