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本研究では、CCN2とVASH1の内軟骨性骨化における役割を解析し、新たな内軟骨性骨化調節メカニズムを解明することを目的としている。昨年度には、軟骨細胞において、VASH1の発現はCCN2の制御下にあることを示した。また、活性酸素分解酵素SOD2との発現調節連関も調べ、VASH1がSOD2を上流で制御することを示した。内軟骨性骨化過程において、軟骨細胞の分化が進行するとともに細胞内のROS（活性酸素種）レベルが上昇し、その結果アポトーシスが誘導されるという報告がある。そのため、肥大軟骨細胞においてSOD2は、上流のCCN2によるVASH1の発現亢進を介して誘導され、ROSレベルの上昇を抑制し、内軟骨性骨化の最終段階である軟骨細胞の細胞死を分化終末期まで防いでいる可能性が推測された。
そこで本年度は、CCN2-VASH1が内軟骨性骨化を調節するメカニズムを解明することを目的とし、軟骨細胞におけるCCN2-VASH1の発現変動が、ROSレベル、アポトーシスに及ぼす影響を調べた。また、軟骨組織におけるCCN2とVASH1の局在を比較した。
ヒト軟骨細胞様細胞株HCS-2/8においてCCN2の発現をsiRNAでノックダウンしたところ、アポトーシスが誘導され、またその誘導はROS阻害剤であるN-acetyl-L-cysteineにより抑制された。また、野生型マウスの成長板において、VASH1がCCN2と同様に肥大軟骨細胞層に局在することを確認した。
これらの成果から、内軟骨性骨化における軟骨細胞の肥大化期にはCCN2-VASH1の発現が亢進し、ROSレベルの制御を介して軟骨細胞の細胞死を分化終末期まで防いでいる可能性が推察される。
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