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複製クランプPCNAは、DNA複製に関わる様々な反応を協調的に機能させる必須因子である。PCNAのDNAへのローディング・アンローディングは、真核生物において少なくとも3種類存在するクランプローダー複合体によって制御される。さらにPCNAアンローディングは、ミスマッチ修復機構によっても制御を受ける。しかしながら、クランプローダーの生体内におけるPCNAアンローディングに対する機能制御や、ミスマッチ修復機構によるPCNAアンローディングの阻害メカニズムもわかっていない。
本研究では、生理的な経路でのDNA複製やPCNAローディング・アンローディング反応を試験管内で再現するツメガエル卵抽出液を解析系とし、精製タンパク質を用いてDNA上にロードしたPCNAのアンローディングを解析した。当該年度はPCNAアンローダーとして考えられているElg1-RFCの変異体を用いて、卵抽出液においても、Elg1-RFCがATP加水分解活性を利用してPCNAをDNAからアンロードすることを示した。興味深いことに、精製Elg1-RFCは卵抽出液中ではPCNAアンローディング活性を示したものの、精製タンパク質のみではDNA上のPCNAをアンロードしなかった。Elg1-RFC以外のクランプローダーがPCNAアンローディングに機能している可能性を考えたが、すべてのクランプローダーを免疫除去した卵抽出液中においても、精製Elg1-RFCはDNAからPCNAをアンロードした。本研究からツメガエル卵抽出液においてもElg1-RFCが主たるPCNAアンローダーであることが示された。さらに、Elg1-RFCがPCNAアンローディング活性を示すためには、何かしらの未同定の因子が必要である可能性が示唆された。
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