| 研究実績の概要 |
平成30年度は昨年度採集した標本サンプル整理、DNA抽出のための下処理を行った。またOhbayashi et al (2008, 2017)のオオクグ7遺伝子座の核マイクロサテライトマーカーについてMultiplex PCRの検討を行い、より簡便で安価なPCRを行うための手法改良を行った。さらに、福島大学資料研究所所蔵のオオクグの貴重な東日本大震災津波前の標本をご提供いただけることとなり、これらからのDNA抽出の検討を行った。
Ohbayashi et al (2008)のマイクロサテライトマーカーでは、遺伝的多様性解析に使用する複数の遺伝子で断片長の長短の差異が存在している。これらのことから１回のPCRで複数の遺伝子座を同時に増やすことが可能かどうか手法検討を行った。その結果、3遺伝子座についてはMultiplexが可能であったため、今後の解析ではこの手法を取り入れることとした。また、新手法を使用することによる断片長の変化の補正は、2008年に採取した島根県・大橋川個体群の遺伝子型が異なる旧手法での既知の断片長を用いて補正を行い、今後のStructure解析に使用する予定である。
福島大学資料研究所所蔵の津波前の貴重な標本については、通常のCTAB法でのDNA抽出を行い、MigSeq解析で使用する1st PCRプライマーでの増幅を試みたが、長い増幅DNAを得ることが難しかった。これは乾燥標本であること、また古い標本は50年以上前のものであることに起因すると考えられ、別手法の適用が必要であることが明らかになった。また、これらの標本抽出DNAについて上記MultiplexでのSSRマーカーによる増幅を試みる予定である。
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