| 研究課題/領域番号 |
17K05898
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| 研究機関 | 岐阜大学 |
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研究代表者 |
柴田 綾 岐阜大学, 工学部, 助教 (50462693)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 遺伝子検出 / 芳香族求核置換反応 |
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| 研究実績の概要 |
生細胞内でのＲＮＡイメージングの報告はこれまでのところごく少数に限られ、確立した方法がないのが現状である。そのため、実用的なプローブの開発が望まれている。生細胞内の遺伝子検出法として標的核酸を鋳型とした化学反応プローブがある。この遺伝子検出法の利点は標的核酸を鋳型とした反応サイクルを回すことで、シグナルを増幅することができる点にある。しかし現在の所、生細胞内で検出できるＲＮＡはβアクチン等の細胞内で発現量の多い遺伝子に限られており、さらなる検出感度の向上が求められている。加えて、これらのプローブの多くは蛍光基質の構造変化をシグナル発生の鍵としているため、使用できる蛍光波長に制限がある。
本研究では、生細胞内での遺伝子検出が実用可能なプローブの構築を目指し、芳香族求核置換反応を利用した検出プローブの高いシグナル増幅能を維持したまま、クリック反応を利用したポスト修飾により、プローブの簡便な多色化を試みた。前年度の結果よりチオール類と転移部位の反応性が高すぎるため生体内に応用した際にバックグラウンド蛍光が高くなる可能性が示された。そのため芳香環の置換基の電子吸引性を低くした転移部位の設計を新たに行い、合成を行った。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
転移部位の設計・合成を試みているが、全体的に反応収率が悪いのに加え、副生成物との分離に手間取ることが多いため。また、妊娠・出産により研究が中断した期間があったため。
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| 今後の研究の推進方策 |
反応条件を再検討し、転移部位の合成改善を目指す。また得られた転移部位に関してはグルタチオンとの反応性について検討する。グルタチオンとの反応性を低く抑えられたものが得られたら、ＤＮＡ鎖に組込みテンプレート反応が進行するか合わせて検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
実験計画が遅れており、有機合成が中心であったため購入額が低くなった。加えて、妊娠・出産で中断期間があったため。
計画に大きな変更はなく、次年度は核酸合成等の消耗品の購入割合が増える予定である。
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