| 研究課題/領域番号 |
17K07089
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| 研究機関 | 弘前大学 |
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研究代表者 |
丹治 邦和 弘前大学, 医学研究科, 助教 (10271800)
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| 研究分担者 |
三木 康生 弘前大学, 医学研究科, 助教 (30709142)
若林 孝一 弘前大学, 医学研究科, 教授 (50240768)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | シヌクレイン / パーキンソン病 / リン酸化 / シヌクレイノパチー |
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| 研究実績の概要 |
シヌクレイン(Syn)は、孤発性および家族性パーキンソン病（PD）に共通した危険因子であり、早期診断のマーカーとして利用を試みられている。またパーキンソン病に限らず、レビー小体型認知症や多系統萎縮症でも異常Synの蓄積が認められ、シヌクレイノパチーと呼ばれている。申請者らは、密度と凝集性の違いを利用して異常Synを正常Synと区別する検出法を確立した。さらに、異常Synの構造変化を感知する分子NUB1を同定し、異常Synの目印となることを報告してきた。
本研究では、異常Synの目印NUB1に対する特異抗体を作製後、シヌクレイノパチーの早期の臨床診断として利用できるSynの定量技術を開発すること、および異常Syn特異抗体投与による病態への影響を明らかにする。
昨年度同定したリン酸化部位に対して特異的なリン酸化NUB1抗体を作成したため、病理学的および生化学的解析をすすめた。
その結果、このリン酸化特異的NUB1抗体はレビー小体型認知症のレビー小体を染色することが明らかとなった。一方、多系統萎縮症に認められるグリア封入体などは陰性であった。生化学的検討からレビー小体型認知症では正常対照例にたいしてリン酸化NUB1の量が有意に増加していた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
最も効果の高かったNUB1のリン酸化部位を絞り込み、その部位に対する合成ペプチドをウサギに免疫し、順調に、抗体を作製できた。作製した抗体の抗原特異性も確認できた。生化学的解析の結果、シヌクレイノパチーではNUB1がすべて不溶化しており、高度にリン酸化されている（未発表）。さらに病理学的検討を行った。リン酸化特異的NUB1の局在や量的変化を明らかにした。
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| 今後の研究の推進方策 |
作製した抗体が特異的にリン酸化NUB1を認識することを確認できたため、NUB1の凝集と特に関連が深いシヌクレインの患者切片を用いて、さらにリン酸化NUB1の局在を検討する。具体的には、患者凍結脳組織からサンプルを作製し、今回作製した抗体を用いた免疫沈降が可能な場合には免疫沈降により、リン酸化NUB1結合分子の同定へと進む予定である。質量分析解析を用いて、リン酸化NUB1の有無を確認する。以上、病態の増悪には修飾異常が関与しており、特にリン酸化の異常はアルツハイマー病やパーキンソン病でも見出されている。凝集抑制効果を指標にスクリーニングしたリン酸化NUB1もシヌクレイノパチーの病態に深くかかわる可能性は高く、治療の標的ともなりえる。
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