| 研究実績の概要 |
我々は以前、進行性大腸がん(mCRC) のFFPE 検体(n = 154)から抽出したDNAより、ゲノム全体におけるDNA コピー数の増減をCGH アレイ法を用いて解析した。その結果、8q24.1-q24.2 に遺伝子コピー数増加（CNG）のみられる患者（n=62）のうち、FOLFIRI療法＋bevacizumab治療群の患者の方がFOLFOX 療法＋bevacizumab治療群よりも有意に長いPFSやOSを示した。この染色体領域に含まれる遺伝子の中から、両併用療法の差別化に使えるバイオマーカーの特定および機能解析を行った。
①8q24.1-q24.2領域に大きくCNGがみられる大腸がん由来のColo320、CNGのないDLD1、両者の中間的なHT29細胞株を比較したところ、irinotecan（FOLFIRIの成分）の感受性はColo320 (IC50 0.013 uM)>HT29 (0.1 uM)>DLD1 (1.01 uM)であった。このことから上記のCGH 法の妥当性が示された。
②8q24.1-q24.2に含まれる5 個の遺伝子（TRIB1, FAM84B, POU5F1B, MYC, NSMCE2）のうち、MycをノックダウンしたColo320は0.2 uMと大きく感受性が減少した。逆にFAM82BおよびNSMCE2を強制発現させるとDLD1細胞でirinotecanへの感受性がそれぞれ0.19、0.09 uMに上昇した。また、これらの遺伝子のうちoxaliplatin感受性を変化させるものは見つからなかった。
③現在、Colo320細胞株やDLD1細胞株からirinotecan、oxaliplatin耐性株を、それぞれSN-38、L-OHT の培地中の濃度を徐々に高め、引き続き作成している。
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| 今後の研究の推進方策 |
１．8q24.1-q24.2に含まれる5 個の遺伝子（TRIB1, FAM84B, POU5F1B, MYC, NSMCE2）のうち、FAM84B, NSMCE2がirinotecan感受性を上昇させる機構を解明する。MYCは単独では感受性を上昇させないが、高感受性の株には必須であることから、FAM84B, NSMCE2それぞれのMYCとのダブルノックダウン、またはダブルで強制発現を行い、どのような相乗効果が生じるかみる。その他、MYCの強制発現による増殖シグナルからストレスが生じ、それによって誘導される細胞老化や細胞周期への影響が候補遺伝子の追加発現によってどう変化するのか検討する。この点はp53やp21、cyclinD_CDK4、6などのタンパクの発現（ウェスタンブロッティング）や活性化（in vitro キナーゼアッセイなど）を追跡して評価する。
２．irinotecan、oxaliplatinに対する薬剤耐性株の作成後、8q24.1-q24.2遺伝子群の機能的な変化を追う。また、この領域を含め全染色体におけるコピー数にどのような変化が起こっているのかCHG法で調べ、親株が8q24.1-q24.2領域にCNGを持つ場合と持たない場合とで対比する。さらに、個々の遺伝子レベルでの変化を調べるのにマイクロアレイ（Affymetrix社DNA chip）による発現解析を行う。
ここまでのデータよりirinotecanの感受性を変化させる遺伝子の機能を解明する。
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