研究実績の概要 |
本年度は、出芽酵母ORC複合体が染色体複製起点を認識するために必須なモチーフeukaryotic origin sensor (EOS; Kawakami et al., 2015, Sci. Rep.)を元に発展させた。本モチーフは最大サブユニットOrc1内に存在する一方、そのDNAとの親和性はORC6量体の1/100未満であった。従って、ORCのDNA結合能には更なるDNA結合モチーフが関わると示唆される。
そこで我々はORCの複数サブユニットを対象とした体系的機能構造解析を行い、ORCのDNA結合能や高次構造形成に関わる新たなモチーフを複数見出した。変異ORC複合体の簡便精製法(Kawakami et al., 2016, Front. Microbiol.; Kawakami et al., 2015, Sci. Rep.)を用いてこのうち1種を詳細に解析したところ、ORCの長年不明であった非典型DNA結合能の役割を解明する突破口となることが判明した(学会発表済み)。この可能性は遺伝学やゲノミクスを用いた解析によっても支持された。
その他、本解析をORCパラログCdc6に拡張した。まず、Cdc6の非典型DNA結合能を鋭敏に検出する生化学システムを確立し、次に非典型DNA結合能の低下した変異Cdc6蛋白質の同定に成功した。現在、慎重に解析を進めている(学会発表済み)。
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