研究実績の概要 |
本研究では、日本における牛寄生Eimeria属原虫の種識別法を開発し、牛コクシジウム症の新たな診断法を確立することを目的とする。今年度は、新規設計したEimeria種特異的なプライマー(alr-1, auf-2, bor-2, bukir-3, car-1, cyf-4, cyr-1, elf-1,espf, ets2-r, suf-2, sur-1, wyf-2, wyr-3, zuf-2)を組み合わせて、Eimeria属原虫の3~4種を同時にPCR増幅するnested multiplex PCRの可能性を評価した。E. cylidricaを増幅するプライマー(cyf-4, cyr-1)、E. subsphericaを増幅するプライマー( suf-2, sur-1)およびE. wyomingensisを増幅するプライマー(wyf-2, wyr-3)をミックスしたプライマーミックスα、E. auburnensisを増幅するプライマー(auf-2, ets2-r)、E. ellipsoidarisを増幅するプライマー(elf-1, ets2-r)およびE. zuerniiを増幅するプライマー(zuf-2, ets2-r)をミックスしたプライマーミックスβ、E. alabamensisを増幅するプライマー(espf, alr-1)、E. bovisを増幅するプライマー(espf, bor-2)、E. bukidnensisを増幅するプライマー(espf, bukir-3)、およびE. canadensissを増幅するプライマー(espf,car-1)をミックスしたプライマーミックスγ、によりEimeria1種、2種、3種、または4種の同時識別が可能であることが明らかになった。以上から、牛寄生Eimeria属原虫10種(E. cylidrica、E. subspherica、E. wyomingensis、E. auburnensis、E. ellipsoidaris、E. zuernii、E. alabamensis、E. bovis、E. bukidnensis、E. canadensis)を識別し、複数種の同時検出も可能なnested multiplex PCR法の開発に成功した。
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