遺伝子改変マウスを用いた糸球体硬化症の新規治療戦略の開発

2017 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 17K08442
• 研究機関: 三重大学
• 研究代表者: GABAZZA CORINA 三重大学, 医学系研究科, 特任助教(研究担当) (10750656)
• 研究分担者: Gabazza Esteban 三重大学, 医学系研究科, 教授 (00293770) ; 安間 太郎 三重大学, 医学系研究科, 助教 (80773887)
• 研究期間 (年度): 2017-04-01 – 2020-03-31
• キーワード: 腎線維症 / 細胞内伝達機構 / 糖尿病 / 糖尿性腎障害 / 遺伝子改変マウス / 腎不全 / 成長因子 / 核酸

研究実績の概要

本研究の目的は腎特異的ヒトトランスフォーミング増殖因子-beta1過剰発現トランジェニックマウスを用いて糖尿病・高血圧による腎線維症マウスモデルを作製し、in vivo 実験によって腎線維症・腎不全に対する新規治療法の開発である。平成29年度では本プロジェクトの研究を行い、以下の成果を得てきた：

1）腎特異的ヒトトランスフォーミング増殖因子-beta1過剰発現による腎線維症・腎不全の経時的な変動を検討した。４週齢のヒトトランスフォーミング増殖因子-beta1トランジェニックマウス及び同週齢の野生型マウスの線維化と腎機能のマーカーを経時的に測定し、16週間を観察した。その結果、野生型マウスでは各々のマーカーは有意な変化を示さなかったが、ヒトトランスフォーミング増殖因子-beta1トランジェニックマウスでは血中クレアチニン、血中尿素窒素、腎組織中ヒドロキシプロリンの濃度は経時的に有意に上昇した。
2）腎特異的ヒトトランスフォーミング増殖因子-beta1過剰発現トランジェニックマウスを用いて糖尿病モデルを作製した。ヒトトランスフォーミング増殖因子-beta1過剰発現トランジェニックマウスにストレプトゾトシン（40mg/kg/day）を五日間腹内投与し、糖尿病マウスモデルを作製した。コントロールマウスには、生理食塩水を同様の方法で投与した。血糖値と腹腔内ブドウ糖負荷試験の検査の結果から、野生型マウスに比べ、ヒトトランスフォーミング増殖因子-beta1過剰発現トランジェニックマウスは糖尿病になりやすいことが明らかになった。腎線維症になりやすいことも明らかとなった。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

平成29年度では薬の投与タイミングを決定する目的で先ず疾患マウスモデルにおいて病態の進行度と病態の経時的な変化を検討したためである。

今後の研究の推進方策

平成30年度では以下の実検を行う予定である：

１）腎線維症の病態形成に糸球体のタコ足細胞と線維芽細胞からのTGF-beta1産生が重要であることが最近注目されている。そこで、in vitro実験においてタコ足細胞と線維芽細胞を用いてTGF-beta１の産生に対するTGF-beta１ siRNA、TGF-beta１アンチセンス及び細胞内情報伝達機構を抑制するトロンボモジュリンの抑制効果を検討する。
２）腎特異的ヒトTGF-beta1過剰発現トランジェニックマウスを用いた糖尿病による腎線維症モデルマウスにおいて人工的に合成されたTGF-beta1 siRNA、TGF-beta1 アンチセンス、トロンボモジュリンが投与された場合の病態抑制の確認を行う。

研究成果

• [国際共同研究] イリノイ大学/スタンフォード大学(米国)
  • 国名: 米国
  • 外国機関名: イリノイ大学/スタンフォード大学
• [雑誌論文] Mice overexpressing latent matrix metalloproteinase-2 develop lung emphysema after short-term exposure to cigarette smoke extract (2018)
  • 著者名/発表者名: Onishi Masahiro、Kobayashi Tetsu、D'Alessandro-Gabazza Corina N.、Fujimoto Hajime、Chelakkot-Govindalayathil Ayshwarya-Lakshmi、Takahashi Yoshinori、Yasuma Taro、Nishihama Kota、Toda Masaaki、Takei Yoshiyuki、Taguchi Osamu、Gabazza Esteban C.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 497 ページ: 332-338
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2018.02.081
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Protein S Exacerbates Chronic Liver Injury and Fibrosis (2018)
  • 著者名/発表者名: Totoki Toshiaki、D' Alessandro-Gabazza Corina N.、Toda Masaaki、Tonto Prince Baffour、Takeshita Atsuro、Yasuma Taro、Nishihama Kota、Iwasa Motoh.、Horiki Noriyuki、Takei Yoshiyuki、Gabazza Esteban C.
  • 雑誌名: Am J Pathol 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1016/j.ajpath.2018.01.007
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] The Medicinal Mushroom, Grifola gargal, Ameliorates Allergic Bronchial Asthma (2018)
  • 著者名/発表者名: Harada Etsuko、D'Alessandro-Gabazza Corina N.、Toda Masaaki、Morizono Toshihiro、Totoki Toshiaki、Yasuma Taro、Nishihama Kota、Kobayashi Tetsu、Sumiya Toshimitsu、Kawagishi Hirokazu、Gabazza Esteban C.
  • 雑誌名: J Med Food 巻: 21 ページ: 136-145
  • DOI: 10.1089/jmf.2017.4016
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Anti-apoptotic activity of human matrix metalloproteinase-2 attenuates diabetes mellitus (2018)
  • 著者名/発表者名: Nishihama Kota、Yasuma Taro、Yano Yutaka、D' Alessandro-Gabazza Corina N.、Toda Masaaki、Hinneh Josephine A.、Baffour Tonto Prince、Takeshita Atsuro、Totoki Toshiaki、Mifuji-Moroka Rumi、Kobayashi Tetsu、Iwasa Motoh、Takei Yoshiyuki、Morser John、Cann Isaac、Gabazza Esteban C.
  • 雑誌名: Metabolism 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1016/j.metabol.2018.01.016
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] A Retrospective Comparison of the Clinical Efficacy of Gefitinib, Erlotinib and Afatinib in Japanese Patients with Non-small Cell Lung Cancer (2018)
  • 著者名/発表者名: Fujiwara A, Yoshida M, Fujimoto H, Nakahara H, Ito K, Nishihama K, Yasuma T, Hataji O, Taguchi O, D'Alessandro-Gabazza CN, Gabazza EC, Kobayashi T
  • 雑誌名: Oncol Res 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.3727/096504018X15151523767752
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Efficacy of osimertinib in a patient with non-small cell lung cancer harboring epithelial growth factor receptor exon 19 deletion/T790M mutation, with poor performance status (2017)
  • 著者名/発表者名: Nishii Yoichi、Hataji Osamu、Ito Kentaro、Watanabe Fumiaki、Kobayashi Tetsu、D'alessandro-Gabazza Corina、Toda Masaaki、Taguchi Osamu、Yamamoto Nobuyuki、Gabazza Esteban
  • 雑誌名: Mol Clin Oncol 巻: 8 ページ: 246-249
  • DOI: 10.3892/mco.2017.1522
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Smart watch-based coaching with tiotropium and olodaterol ameliorates physical activity in patients with chronic obstructive pulmonary disease (2017)
  • 著者名/発表者名: Hataji O, Nishii Y, Ito K, Sakaguchi T, Saiki H, Suzuki Y, D'Alessandro-Gabazza C, Fujimoto H, Kobayashi T, Gabazza EC, Taguchi O
  • 雑誌名: Exp Ther Med 巻: 14 ページ: 4061-4064
  • DOI: 10.3892/etm.2017.5088
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Oligonucleotide-targeting periostin ameliorates pulmonary fibrosis (2017)
  • 著者名/発表者名: Tomaru A、Kobayashi T、Hinneh J A、Baffour Tonto P、D'Alessandro-Gabazza C N、Fujimoto H、Fujiwara K、Takahashi Y、Ohnishi M、Yasuma T、Nishihama K、Yoshino M、Takao K、Toda M、Totoki T、Takei Y、Yoshikawa K、Taguchi O、Gabazza E C
  • 雑誌名: Gene Ther 巻: 24 ページ: 706-716
  • DOI: 10.1038/gt.2017.80
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Inhibition of Cell Apoptosis and Amelioration of Pulmonary Fibrosis by Thrombomodulin (2017)
  • 著者名/発表者名: Fujiwara Kentaro、Kobayashi Tetsu、Fujimoto Hajime、Nakahara Hiroki、D'Alessandro-Gabazza Corina N.、Hinneh Josephine A.、Takahashi Yoshinori、Yasuma Taro、Nishihama Kota、Toda Masaaki、Kajiki Masahiro、Takei Yoshiyuki、Taguchi Osamu、Gabazza Esteban C.
  • 雑誌名: Am J Pathol 巻: 187 ページ: 2312-2322
  • DOI: 10.1016/j.ajpath.2017.06.013
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Low dose of alcohol attenuates pro-atherosclerotic activity of thrombin (2017)
  • 著者名/発表者名: Toda M, Totoki T, Nakamura C, Yasuma T, D' Alessandro-Gabazza CN, Mifuji-Moroka R, Nishihama K, Iwasa M, Horiki N, Gabazza EC, Takei Y
  • 雑誌名: Atherosclerosis 巻: 265 ページ: 215-224
  • DOI: 10.1016/j.atherosclerosis
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Recent studies move closer to answering questions about sequential therapy for anaplastic lymphoma kinase-rearranged non-small cell lung cancer (2017)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi Tetsu、Fujimoto Hajime、D’Alessandro-Gabazza Corina、Gabazza Esteban C.、Hataji Osamu
  • 雑誌名: J Thorac Dis 巻: 9 ページ: 2847-2851
  • DOI: 10.21037/jtd.2017.08.114
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] β2 adrenergic agonist suppresses eosinophil-induced epithelial-to-mesenchymal transition of bronchial epithelial cells (2017)
  • 著者名/発表者名: Kainuma K, Kobayashi T, D'Alessandro-Gabazza CN, Toda M, Yasuma T, Nishihama K, Fujimoto H, Kuwabara Y, Hosoki K, Nagao M, Fujisawa T, Gabazza EC
  • 雑誌名: Respir Res 巻: 18 ページ: 79-79
  • DOI: 10.1186/s12931-017-0563-4
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] 気管支喘息におけるmatrix metalloproteinase-2(MMP-2)の変動 (2017)
  • 著者名/発表者名: 藤原 研太郎、小林 哲、浅山 健太郎、都丸 敦史、高橋 佳紀、大西 真裕、中原 博紀、藤本 源、ダレッサンドロ ガバザ コリナ、戸田 雅昭、田口 修、ガバザ エステバン
  • 学会等名: 第16回Kinki Hokuriku Airway disease Conference
• [学会発表] 気道の線維化の先には発癌があるのか？ (2017)
  • 著者名/発表者名: 小林 哲、Esteban C. Gabazza、浦田 健太郎、高橋 佳紀、都丸 敦史、藤原 研太郎、大西 真裕、中原 博紀、藤本 源、Corina N. D’Alessandro-Gabazza、戸田 雅昭、田口 修
  • 学会等名: 第36回気道分泌研究会
• [学会発表] MMP-2過剰発現マウスにおける短期タバコ煙によるemphysema誘発の検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 大西 真裕、浅山 健太郎、高橋 佳紀、都丸 敦史、藤原 研太郎、中原 博紀、藤本 源、Corina N. D’Alessandro-Gabazza、Esteban C. Gabazza、田口 修、小林 哲
  • 学会等名: 第57回日本呼吸器学会学術講演会
• [学会発表] 気管支喘息モデルにおけるヒトMatrix Metalloproteinase-2の効果 (2017)
  • 著者名/発表者名: 藤本 源、小林 哲、浅山 健太郎、高橋 佳紀、都丸 敦史、藤原 研太郎、大西 真裕、中原 博紀、Corina N. D’Alessandro-Gabazza、田口 修、Esteban Gabazza
  • 学会等名: 第57回日本呼吸器学会学術講演会
• [学会発表] ブレオマイシン誘発肺線維症におけるプロテインSのアポトーシス抑制効果についての検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 中原 博紀、小林 哲、浅山 健太郎、都丸 敦史、高橋 佳紀、藤原 研太郎、大西 真裕、藤本 源、ガバザ コリナ、ガバザ エステバン、田口 修
  • 学会等名: 第57回日本呼吸器学会学術講演会
• [学会発表] マウス肺線維症モデルにおいてthrombomodulinは防御的に働く (2017)
  • 著者名/発表者名: 浅山 健太郎、小林 哲、高橋 佳紀、都丸 敦史、藤原 研太郎、大西 真裕、中原 博紀、藤本 源、Corina Gabazza、Esteban Gabazza、田口 修
  • 学会等名: 第57回日本呼吸器学会学術講演会
• [学会発表] 遺伝子改変マウスを用いた糖尿性腎症モデルの作成 (2017)
  • 著者名/発表者名: 西濵 康太、安間 太郎、竹下 敦郎、ガバザ コリナ、戸田 雅昭、矢野 裕、ガバザ エステバン
  • 学会等名: 第60回日本糖尿病学会年次学術集会
• [学会発表] TGF-β1によるインスリン抵抗性の誘導in vitroでの検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 竹下 敦郎、井上 知紗、真木 加奈子、岡野 優子、佐々木 賢、西濵 康太、橋本 礼、堀田 康広、上村 明、坂本 正子、安間 太郎、大西 悠紀、鈴木 俊成、古田 範子、矢野 裕、戸田 雅昭、ガバザ コリナ、ガバザ エステバン、竹井 謙之
  • 学会等名: 第60回日本糖尿病学会年次学術集会
• [学会発表] 気管支喘息患者におけるマトリックスメタロプロテアーゼ2の変動 (2017)
  • 著者名/発表者名: 藤本 源、小林 哲、浅山 健太郎、都丸 敦史、高橋 佳紀、藤原 研太郎、大西 真裕、中原 博紀、西濵 康太、安間 太郎、ガバザ コリナ、戸田 雅昭、ガバザ エステバン、田口 修
  • 学会等名: 第66回日本アレルギー学会学術大会
• [学会発表] マトリックスメタロプロテアーゼ2遺伝子導入喘息マウスにおける気道病変の解析 (2017)
  • 著者名/発表者名: 藤原 研太郎、小林 哲、浅山 健太郎、都丸 敦史、高橋 佳紀、大西 真裕、中原 博紀、藤本 源、西濵 康太、安間 太郎、ガバザ コリナ、戸田 雅昭、ガバザ エステバン、田口 修
  • 学会等名: 第66回日本アレルギー学会学術大会
• [学会発表] 気道リモデリングにおけるMMP-2の役割の解明 (2017)
  • 著者名/発表者名: 桑原 優、戸田 雅昭、ガバザ コリナ、安間 太郎、貝沼 圭吾、長尾 みづほ、ガバザ エステバン、藤澤 隆夫
  • 学会等名: 第66回日本アレルギー学会学術大会
• [学会発表] MMP-2過剰発現マウスにおけるタバコ煙抽出液吸入による肺の気腫化の検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 大西 真裕、小林 哲、浅山 健太郎、高橋 佳紀、都丸 敦史、藤原 研太郎、中原 博紀、藤本 源、田口 修、戸田 雅昭、ガバザ コリナ、ガバザ エステバン
  • 学会等名: 第91回閉塞性肺疾患研究会
• [学会発表] L858R変異EGFR導入マウスに発生した肺腺癌の組織パターンの特徴 (2017)
  • 著者名/発表者名: 藤原 研太郎、小林 哲、浅山 健太郎、都丸 敦史、高橋 佳紀、大西 真裕、中原 博紀、藤本 源、安間 太郎、ガバザ コリナ、ガバザ エステバン、田口 修
  • 学会等名: 第58回日本肺癌学会学術集会
• [学会発表] The role of eosinophils and matrix metalloproteinase-2 in airway remondeling (2017)
  • 著者名/発表者名: Kuwabara Y., Toda M., Yasuma T., Kainuma K., Nagao M., Corina D. N., Esteban G. C., Fujisawa T
  • 学会等名: European Academy of Allergy and Climical Immunology EAACI Congress 2017
  • 国際学会
• [学会発表] Role of Matrix Metalloproteinase-2 and Correlation with the Anticoagulant System in Diabetes (2017)
  • 著者名/発表者名: K. Nishihama, T. Yasuma, A. Takeshita, T. Totoki, Y. Takahashi, K. Fujiwara,
  • 学会等名: ISTH Congress and 63rd Annual SSC Meeting
  • 国際学会
• [学会発表] Protective Effect of Protein S against the Development of Diabetic Nephropathy in Mice (2017)
  • 著者名/発表者名: A. Takeshita, K. Nishihama, T. Yasuma, K. Fujiwara, E. Harada, C.N. D’Alessandro-Gabazza, M. Toda, T. Kobayashi, Y. Yano, E.C. Gabazza
  • 学会等名: ISTH Congress and 63rd Annual SSC Meeting
  • 国際学会
• [学会発表] Thrombin-activable Fibrinolysis Inhibitor (Procarboxypeptidase B2) Deficiency Protects from Carbon Tetrachloride-induced Liver Fibrosis (2017)
  • 著者名/発表者名: T. Totoki, C.N. D’Alessandro-Gabazza, R. Mifuji-Moroka, K. Nishihama, A. Takeshita, T. Yasuma, Y. Takahashi, K. Fujiwara, M. Toda, M. Nakamura, N. Horiki, M. Iwasa, T. Kobayashi, Y. Takei, E.C. Gabazza
  • 学会等名: ISTH Congress and 63rd Annual SSC Meeting
  • 国際学会
• [学会発表] Overexpression of Protein S Exacerbates Carbon Tetrachloride-induced Liver Injury and Fibrosis in Mice (2017)
  • 著者名/発表者名: Totoki Toshiaki, D’Alessandro-Gabazza Corina N., Moroka-Mifuji Rumi, Nishihama Kota, Takeshita Atsuro, Yasuma Taro, Takahashi Yoshinori, Fujiwara Kentaro, Toda Masaaki, Iwasa Motoh, Kobayashi Tetsu, Takei Yoshiyuki, and Gabazza-Esteban
  • 学会等名: BIT’s 2nd Annual World Congress of Digestive Disease-2017
  • 国際学会
• [産業財産権] Transgenic mouse expressing kidney-specific human tgf-beta1, and biomarker for tissue fibrosis mouse model (2017)
  • 発明者名: 矢野 裕、ガバザ エステバン、ガバザ コリナ
  • 権利者名: 矢野 裕、ガバザ エステバン、ガバザ コリナ
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: US20170135328A1
  • 外国