| 研究課題/領域番号 |
17K08527
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| 研究機関 | 弘前大学 |
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研究代表者 |
村上 学 弘前大学, 医学研究科, 教授 (80302090)
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| 研究分担者 |
尾野 恭一 秋田大学, 医学系研究科, 教授 (70185635)
大場 貴喜 秋田大学, 医学系研究科, 講師 (80431625)
阪上 洋行 北里大学, 医学部, 教授 (90261528)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | calcium / mouse |
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| 研究実績の概要 |
Ca/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼIV( CaMKIV ) の心筋における機能の解明が、本研究の目的である。「CaMKIVがL型電位依存性 Ca チャネル発現を誘導する。かつ、心筋における交感神経制御にも関与する。」という仮説を着想した。本研究ではCaMKIV欠損マウスを用い、①遺伝子発現、②個体（心電図、血圧、超音波）、③組織（心筋収縮、活動電位）、④細胞（ Ca 濃度、 Caチャネル特性）における交感神経刺激に対する反応を精査し、仮説を検証する。欠損マウスにおける Caチャネル発現低下、交感神経刺激に対する反応性の低下等、断片的ではあるが仮説を支持する結果を得ている。本研究により CaMKIVを標的とする心筋保護治療への応用・展開が期待される。
メインプロジェクト( CaMKIV欠損マウスを用いた実験) a.心肥大、心収縮に関与する遺伝子発現の変化（ CREB、 MEF2、 Caチャネルなど） b.個体における交感神経制御機構（交感神経刺激と心電図、超音波、血圧変動） c.組織レベルでの交感神経刺激に対する応答性（心筋の活動電位や収縮） d.心筋の初代培養細胞を用いる実験系：野生型、および CaMKIV 欠損マウスから心筋細胞を単離・培養し、遺伝子過剰発現系等を用い、 CaMKIV の重要性を検定する。 e.細胞レベルにおける変化（電位依存性 Ca チャネル特性を細胞内 Ca 濃度測定、Patch-clampで検定する。） a-dに関してはほぼ終了した。細胞内 Ca 濃度測定や、パッチクランプ法による電流測定系も、ほぼ実験系を確立した状況である。現在、論文投稿を準備中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
研究はほぼ順調に進行している。共同研究者間の連絡も密である。今後は電気生理学的検討をさらに加え、学会発表や論文発表を念頭に、さらに研究を発展させる。
研究遂行に重要な心筋細胞培養の実験系を確立した。現在、細胞培養を用い、細胞内カルシウム濃度測定、PKA活性測定を測定中である。パッチクランプ系も確立した。また、論文投稿を準備中である。
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| 今後の研究の推進方策 |
次年度以降は計画通り、電気生理学的検討中心に研究を遂行する。
細胞内PKA(protein kinase A)活性を測定する実験系を確立、応用し、カルモジュリンIVの有無によるPKAへの影響を精査する方向で、発展させるべく努力する。細胞内PKA活性測定に関しては、測定系を確立したと言える。論文を投稿する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
現在投稿中の論文校正・投稿費用、さらに学会参加費用等も考慮し、できるだけ節約に努めた。研究成果を公表するために必要となる経費にあてる予定である。
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