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2019 年度 実施状況報告書

腸内細菌代謝産物による消化管ホルモン分泌調節メカニズムの解明

研究課題

研究課題/領域番号 17K08529
研究機関東京大学

研究代表者

坪井 貴司  東京大学, 大学院総合文化研究科, 教授 (80415231)

研究分担者 北口 哲也  東京工業大学, 科学技術創成研究院, 准教授 (60432374)
研究期間 (年度) 2017-04-01 – 2021-03-31
キーワードシグナル伝達 / 消化管ホルモン
研究実績の概要

本年度、これまで生細胞イメージングを用いたスクリーニング解析を行っていない腸内細菌代謝産物を小腸内分泌L細胞株GLUTag細胞およびSTC-1細胞に投与し、細胞内カルシウム濃度変化への影響を測定した。その結果、酪酸、L-グルタミンといった物質を含む合計5種類の腸内細菌代謝産物の投与によって細胞内カルシウム濃度上昇が観察された。これらの中で、特にGLP-1分泌を増強したL-グルタミンについて、その作用機序について解析を行った。
GLP-1分泌には、細胞内Ca2+濃度([Ca2+]i)とcAMP濃度([cAMP]i)上昇が重要である。そこでまず、マウス小腸内分泌L細胞由来GLUTag細胞株内(以下、L細胞)での、L-グルタミンによる[Ca2+]iと[cAMP]i上昇機構について解析した。細胞外Na+濃度を低下させ、L細胞のナトリウム依存性グルコース輸送体の機能を阻害したところ、L-グルタミン投与による[Ca2+]i上昇は観察されなかった。一方、味覚受容体の一種であるtaste receptor type 1 member 3(TAS1R3)の阻害は、L-グルタミンによる[cAMP]i上昇を抑制したが、[Ca2+]i上昇は抑制しなかった。CRISPR/Cas9を用いて、TAS1R3と、それとヘテロ二量体を形成するTAS1R1の変異L細胞を樹立した。TAS1R1変異L細胞は、L-グルタミンによる[cAMP]i上昇を示した。一方、一部のTAS1R3変異L細胞では、[cAMP]i上昇やGLP-1分泌を示さなかった。これらの結果から、TAS1R3が、既知の経路とは異なる形で、L-グルタミンによる[cAMP]i上昇とGLP-1分泌に重要な役割を担っていることを示唆している。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

4: 遅れている

理由

新型コロナウイルスの影響で、試薬類の購入ができなくなっただけでなく、実験動物の購入および学内への入構も制限されたため、実験自体を進めることができなくなったため。

今後の研究の推進方策

マウス個体から急性単離培養した小腸または、マウス個体の消化管へ直接腸内細菌代謝産物を注入し、GLP-1分泌へ与える影響を検証する。

次年度使用額が生じた理由

新型コロナウイルスの影響で試薬類や実験動物の購入ができなくなり、また学内への入構が制限されたため、実験がストップしたため。状況が終息した後、早急にELISAによるスクリーニングを行う。

  • 研究成果

    (4件)

すべて 2020 2019 その他

すべて 国際共同研究 (1件) 雑誌論文 (1件) (うち国際共著 1件、 査読あり 1件) 学会発表 (2件) (うち招待講演 1件)

  • [国際共同研究] University of Bonn(ドイツ)

    • 国名
      ドイツ
    • 外国機関名
      University of Bonn
  • [雑誌論文] Glutamine-induced signaling pathways via amino acid receptors in enteroendocrine L cell lines2020

    • 著者名/発表者名
      Nakamura Takumi、Harada Kazuki、Kamiya Taichi、Takizawa Mai、K?ppers Jim、Nakajima Kazuo、G?tschow Michael、Kitaguchi Tetsuya、Ohta Kunihiro、Kato Tadafumi、Tsuboi Takashi
    • 雑誌名

      Journal of Molecular Endocrinology

      巻: 64 ページ: 133~143

    • DOI

      10.1530/JME-19-0260

    • 査読あり / 国際共著
  • [学会発表] 腸内環境感受による消化管ホルモン分泌調節機構2019

    • 著者名/発表者名
      坪井貴司
    • 学会等名
      うま味研究会公開シンポジウム
    • 招待講演
  • [学会発表] L-グルタミンによるアミノ酸受容体を介したグルカゴン様ペプチド-1分泌制御機構の解明2019

    • 著者名/発表者名
      原田一貴, 中村匠, 神谷泰智, 滝澤舞, 中島一夫,北口哲也,太田邦史, 坪井貴司
    • 学会等名
      日本分子生物学会年会

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公開日: 2021-01-27  

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