研究課題
近年、子宮頸部(以下、頸部)腺癌の患者数は増加し、子宮頸癌の25%を占めている。頸部扁平上皮癌と比較して頸部腺癌では早期から浸潤・転移し、治療抵抗性が高いため、その予後は悪い。予後改善のためには、治療標的として設定可能な分子の同定や新たな治療戦略の確立が求められる。本研究では、申請者がこれまでの研究で新たに確認した頸部腺癌における膜型エストロゲン受容体であるG protein-coupled receptor 30 (以下、GPR30)の発現とその悪性化への関与に焦点をしぼり、その役割を明らかにすることを目的としている。初年度は、頸部腺癌手術材料を用いた免疫組織化学的検討を行った。50症例程度の頸部腺癌の各組織型の手術症例に対し、GPR30の免疫染色を行い、陽性強度・面積をスコア化、局在領域を評価した。また、ER、ERαの免疫染色も行い、染色評価を行った。免疫染色の結果、ER、ERαは核で陽性となり、GPR30は細胞膜と細胞質に陽性となった。非腫瘍頸部腺上皮では、ER、ERα陽性、GPR30陰性であった。一方、頸部腺癌ではER、ERαは過半で陰性、GPR30は過半で陽性となった。組織型によるGPR30発現の違いは見られなかった。並行して、頸部腺癌細胞株でのGPR30欠損株の作製を試みた。CRISPR-Cas9を用い、GPR30に対する複数のgRNAを設定し、欠損株の樹立を試みているが、現在までに有望な結果は得られていない。GPR30高発現株作成のため、FLAGタグしたGPR30発現ベクターを構築しており、これを用いてGPR30安定高発現株を樹立する予定である。
2: おおむね順調に進展している
頸部腺癌手術材料を用いた免疫組織化学的検討では、良好な結果を得ることが出来ており、現在論文投稿準備中である。GPR30高発現株作成のため、FLAGタグしたGPR30発現ベクターを構築した。一方、GPR30の欠損株の作製には難渋している。これまでに複数回CRSPR-Cas9を用いて欠損株取得を試みているが、株化には至っていない。現在は、レンチウイルスを用いた高効率のCRSPR-Cas9システム、同じくレンチウイルスを用いたshRNAによる安定的な発現抑制を導入する準備を進めている。
GPR30欠損株または安定的な発現抑制株樹立のために、レンチウイルスを用いた高効率のCRSPR-Cas9システム、同じくレンチウイルスを用いたshRNAによる安定的な発現抑制を導入する。構築したFLAG-GPR30ベクターを用い、GPR30高発現株を樹立する。
すべて 2017
すべて 雑誌論文 (5件) (うち査読あり 5件、 オープンアクセス 2件) 学会発表 (2件)
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