| 研究課題/領域番号 |
17K08731
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| 研究機関 | 兵庫医科大学 |
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研究代表者 |
辻村 亨 兵庫医科大学, 医学部, 教授 (20227408)
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| 研究分担者 |
佐藤 鮎子 兵庫医科大学, 医学部, 講師 (20419823)
阿部 晋也 兵庫医科大学, 医学部, 助教 (70596725)
篠原 義康 兵庫医科大学, 医学部, 助教 (60723509)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 病理学 |
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| 研究実績の概要 |
不死化中皮細胞（Met5A）にpLenti-U6-CDKN2A sgRNA-SFFV-Cas9-2A-PuroあるいはpLenti-U6-BAP1 sgRNA-SFFV-Cas9-2A-Puroを導入して、CDKN2A-Knock Out (KO)中皮細胞およびBAP1-KO中皮細胞を作製した。Met5A（親株）と比較して、CDKN2A-KO中皮細胞は、通常の培養条件において増殖能および細胞形態に有意な変化を認めなかった。一方、BAP1-KO中皮細胞は、通常の培養条件において増殖能に有意な差を認めなかったものの細胞形態は著しく変化して大型化を示した。
CDKN2AあるいはBAP1遺伝子をそれぞれKOしただけでは明らかな増殖能の亢進を認めなかったので、CDKN2A-KO中皮細胞にpLenti-U6-BAP1 sgRNA-SFFV-Cas9-2A-Puroを導入してCDKN2A & BAP1-KO中皮細胞を作製した。今後は、double-KO中皮細胞の生物学的特性についても解析を進める。
また、BAP1免疫染色を用いて、臨床検体におけるBAP1発現を調べたところ、BAP1をヘテロに発現する中皮腫が存在することを確認した。腫瘍組織では、部位によってBAP1の性状が異なる可能性がある。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
CRISPR-Cas9 システムを用いて、不死化中皮細胞（Met5A）を親細胞として、CDKN2A-KO中皮細胞およびBAP1-KO中皮細胞の作製に成功し、これらのKO中皮細胞の生物学的特性について解析を進めている。また、CDKN2A & BAP1-KO中皮細胞の作製にも成功し、CDKN2A欠失とBAP欠失による相加的あるいは相乗的効果の可能性についても解析を進めている。
BAP1の性状が異なると考えられる腫瘍細胞から混成される中皮腫が存在しうることを確認した。
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| 今後の研究の推進方策 |
CDKN2A-KO中皮細胞、BAP1-KO中皮細胞、CDKN2A & BAP1-KO中皮細胞の生物学的特性の解析を続け、中皮細胞の腫瘍化におけるCDKN2AおよびBAP１の役割を明らかにする。野生型BAP1中皮腫細胞株からBAP1-KO中皮腫細胞株を樹立し、生物学的特性を比較して、中皮腫におけるBAP1の役割を明らかにする。必要に応じて、移植モデルを使用してBAP1の生物学的作用を解析する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
計画していた物品（消耗品）を変更したこと、物品の価格が変更したこと等により、総額6,018円の次年度使用額が生じた。 次年度使用額については研究を円滑に進めるための消耗品の購入に充てる。
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