| 研究課題/領域番号 |
17K08778
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| 研究機関 | 愛知県心身障害者コロニー発達障害研究所 |
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研究代表者 |
飯尾 明生 愛知県心身障害者コロニー発達障害研究所, 発生障害学部, 客員研究者 (80344349)
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| 研究分担者 |
松木 亨 愛知県心身障害者コロニー発達障害研究所, 発生障害学部, 主任研究員 (90332329)
上田 昌史 愛知県心身障害者コロニー発達障害研究所, 発生障害学部, リサーチレジデント (90791541)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | NLGN4X / 自閉症 / エピジェネティックス / CpG / メチル化 / MeCP2 / AVP / AKT |
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| 研究実績の概要 |
本研究は、ヒト自閉症原因遺伝子ニューロリギン4X(NLGN4X)について、自閉症での遺伝子発現の変化の有無、その発現の増減を引き起こす非遺伝的背景（エピジェネティックス、環境要因）とそれによって引き起こされる分子病態を明らかにし、自閉症発症のメカニズムの解明や、発現量を指標とした新規診断法、及び発現調節を標的にした治療法の確立とQOLの改善を目的としている。本年度は昨年度に引き続きメチル化を主体としたエピジェネティックな発現制御機構の解明と、NLGN4Xのストレス刺激による発現制御機構の解析を行った。まず、NLGN4Xの発現が抑制されている細胞での発現抑制メカニズムを調べるため、HeLa細胞をTSAおよび5-AzaCにより処理するとCGIプロモーターには変化がなく、コアプロモーターの脱メチル化を介して発現が増加することがわかった。次にNLGN4Xの高浸透圧刺激による発現変化を調べたところ、AKTシグナルを介して発現増加していることがわかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
コアプロモーター及CGIプロモーターのChIP解析が難航している。また、CRISPR-CAS9による単純な発現のON/OFFではsiRNAやmicroRNAを用いた発現抑制に比べ表現型の明確な違いは明らかになっていない。
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| 今後の研究の推進方策 |
次年度は引き続きプロモーターのCpGメチル化解析をNLGN4X発現細胞/ NLGN4X非発現細胞で継続し、発現抑制、発現促進におけるユビキタスなメチル化プロファイルを明らかにするとともに、CRISPR-CAS9システムを用いたジーンドライブにより、NLGN4X非発現細胞でのNLGN4X発現活性化、NLGN4X発現細胞での発現不活性化を人為的にコントロールし、神経細胞の表現型にどのような影響がみられるか検討する。また、Sp1,CEBPs,HDACなどMeCP2以外の転写制御因子によるプロモーターのChIP解析を行い、クロマチンレベルでの発現制御プロファイルを明らかにする。一方、NRXN2β-NLGN4Xを介したAVP発現、分泌制御について細胞内シグナルを中心に検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究所移転のため前年度末の物品の購入を控えたため、次年度は研究環境の再セットアップも含めた物品の購入を予定している。
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