研究課題
申請者らは，ウイルス増殖過程においてNPが宿主のヒストンアセチル化酵素GCN5とPCAFにより，アセチル化されることを報告した（JBC, 2018）．本研究では，アセチル化NPと相互作用するタンパク質に焦点を当て，NPアセチル化の生物学的意義を解明する．過去の論文により，SMARCA2やSMARCA4といったブロモドメインタンパク質とNPとの結合が示されていることから，共沈降法でこれを確かめる実験を開始した．SMARCA2とSMARCA4の組換えタンパク質は既に作成済である．NPは，無細胞系システムを用いて，種々のタグを付加したものを発現させた．しかし，NP組換えタンパク質を大腸菌で作成すると，その過程で先にアセチル化されることが問題であったが，無細胞系システムを用いても同様にアセチル化されていた．今後は発現後に脱アセチル化酵素で処理することで，このアセチル化を外す実験を行う予定である．また，NPの研究遂行中にPAのアセチル化も発見した．PAのエンドヌクレアーゼ活性は，ウイルス増殖過程において必要不可欠な反応である．我々の研究により，① PAがGCN5とPCAFによってアセチル化を受けること，② PAアセチル化によってエンドヌクレアーゼ活性が賦活化されること，③ アセチル化を受けるアミノ酸はK19であること，④ K19をグルタミンに変異させ（K19Q），定常的なアセチル化をミミックするとエンドヌクレアーゼ活性が賦活化されることなどを示した．また，アセチル化を受けないが，リジンの正電荷をミミックするアルギニンに変異させると（K19R），エンドヌクレアーゼ活性は増強されなかった．以上より，アセチル化によってPAのエンドヌクレアーゼ活性が調節されることが示唆された．その他，エボラウイルスNPとVP40が試験管内においてアセチル化修飾されることも報告した（BBRC, 2018）．
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すべて 国際共同研究 (1件) 雑誌論文 (2件) (うち国際共著 1件、 査読あり 1件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (3件) 備考 (2件)
Frontiers in Behavioral Neuroscience
巻: 13 ページ: 65
10.3389/fnbeh.2019.00065
BIO Clinica
巻: 34 ページ: 68-73
http://p.bunri-u.ac.jp/lab08/index.html
https://researchmap.jp/daihatake926
