| 研究課題/領域番号 |
17K08997
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| 研究機関 | 関西医科大学 |
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研究代表者 |
吉賀 正亨 関西医科大学, 医学部, 講師 (70434834)
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| 研究分担者 |
保坂 直樹 関西医科大学, 医学部, 研究員 (30388459)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 内因性ジギタリス様物質 / マリノブファゲニン / マリノブフォトキシン / エステラーゼ / ELISA / HPLC |
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| 研究実績の概要 |
内因性ジギタリス様物質（EDLF）はナトリウム代謝を介して高血圧発症に関わると考えられている．しかし産生分泌機序が解明されていないため十分な研究が成されていない．EDLFの中でマリノブファゲニン（MBG）とMBGにスベロイルアルギニンがエステル結合したマリノブフォトキシン（MBT）は高血圧発症に強く関係している．しかしMBTとMBGの関係は全く解明されておらず、生体内のどのようなエステラーゼをはじめとするどのような酵素がMBTのエステル結合の分解に関与しているのかまったく解明されていなかった。
今回、標品のMBT（1mg/ml）にトリプシン（1ng/ml、１０μg/ml）、組織型プラスミノーゲン活性化因子（t-PA)（1unit、50unit）、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（u-PA）（400unit)、アンジオテンシン変換酵素（ACE)（５ｍUnit)、カリクレイン（1unit）をそれぞれ添加し、37℃で1時間、24時間後にエステル結合の分解により生じたMBGを高速液体クロマトグラフィー（HPLC）を用いて溶出時間ごとに分離しELISAを用いて各分画のMBG様免疫活性物質をenzyme-linked immunosorbent assay ELISAで測定すればMBGとMBTを両方同時に定量することが可能である。本方法を用いたところ、各酵素で薬理学的な添加量で24時間反応後にはMBGの産生がみられた。しかし、生理的濃度や1時間程度の反応ではほとんどMBGの産生はみられなかった
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本検討方法であるHPLCは1検体測定に時間がかかることと測定後カラムの安定化の時間が必要なため時間を要する。
基質であるMBTと各種酵素のバランスや反応時間についてのデータがなく、適時調整しながらの進行であるため時間を要している。
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| 今後の研究の推進方策 |
今まで行ってきた各酵素の薬理学的検討に加え、ホルモン感受性リパーゼの関与の検討について同様の方法を用いて行う予定である。またMBTだけでなく同様にエステル結合をもつtelocinobufotoxin(TCT)についても同様の検討をおこない、多角的にEDLFの産生メカニズムの解明を行う予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
本年度の実施計画内容の遅れにともない物品の購入が予定より少額であった。
次年度に本年度の遅れを取り戻す予定である
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