非ウイルス性慢性炎症に伴う発癌メカニズムの解明と早期血清診断法の確立

2017 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 17K09004
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 松下 一之 千葉大学, 医学部附属病院, 准教授 (90344994)
• 研究分担者: 西村 基 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (80400969) ; 星野 忠次 千葉大学, 大学院薬学研究院, 准教授 (90257220)
• 研究期間 (年度): 2017-04-01 – 2020-03-31
• キーワード: 非ウイルス性慢性炎症 / 自己抗体 / バイオマーカー / がん治療 / がん診断 / マウスモデル / Wntシグナル

研究実績の概要

非ウイルス性の慢性炎症が癌化を誘導するメカニズムは未解明の点が多い。我々はc-myc遺伝子転写抑制因子FIR、Far-upstream element-binding protein-interacting repressor、（別名PUF60）がWntシグナル（c-myc遺伝子の発現増大をもたらす）の活性化からみた発癌機序や早期診断法の確立をめざしている。消化器癌ではFIRの転写抑制部位のexon 2を欠損したスプライシング変異 (FIRdelexon 2) が発現し、ドミナントネガティブ効果によりc-myc遺伝子の転写が活性化している。一方悪性腫瘍が合併する自己免疫疾患患者（シェーグレン症候群や皮膚筋炎）血清中に抗PUF60/FIR自己抗体が見いだされた。本研究ではWntシグナルに注目して、非ウイルス性の慢性炎症刺激に基づく発癌メカニズムをマウスモデルと臨床検体を用いて明らかにし、抗FIRs自己抗体の検出系を確立して自己免疫疾患に合併する早期発癌の新規癌診断法の一助にすることを目的とした。
本年度は、多くのがん患者の血清中にも抗PUF60/FIR自己抗体が検出されることを確認して論文報告した。現在、病態との関連をより正確にしらべるためのELISA系の作製に着手した。そのための抗PUF60/FIR抗体をファージディスプレイ法により同定している。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

本年度は、多くのがん患者の血清中にも抗PUF60/FIR自己抗体が検出されることを確認して論文報告をすることができた。さらに現在、病態との関連をより正確にしらべるためのELISA系の作製に着手した。そのための抗PUF60/FIR抗体をファージディスプレイ法により同定している。現在、抗原との反応性を確認してる。新規の抗体が作製できたことが確認できれば、すでに作製したFIR/PUF60のＣ末端のマウスモノクローナル抗体を合わせてサンドイッチELISA系が可能である。

今後の研究の推進方策

本研究では慢性炎症刺激による発癌動物モデルと臨床検体の解析を行い、Wntシグナルの活性化とFIRの機能異常の関連性に着目して慢性炎症に癌化がみられるトリガー（鍵分子）を同定する。本研究において種々の癌患者の血清中のFIRΔexon2に対する自己抗体の存在が確認できた。今後の展開では、抗FIR/FIRΔexon2自己抗体の検出系を確立してFIRスプライシング変異を指標とした新しい癌診断法の一助にすることを目的とする。精製されたFIRΔexon2（513アミノ酸）の全長タンパク質を抗原とした（星野忠治）。事前に文書による同意を得た種々の癌患者（千葉大病院通院中）と健常者（コントロール）血清を用いて、FIRΔexon2に対する自己抗体が存在するかをドットブロットにより調べたところ抗FIRΔexon2自己抗体が検出された。現在までに検討では、ヒト胃癌組織とGanマウス胃腫瘍のタンパク質の比較するとp-ERK, FBW7,　E-cadherinの発現に違いが認められた（未発表データ）。ヒト胃癌組織ではp-ERK, FBW7,　E-cadherinの発現変化が炎症から癌化への形質転換に重要であることが強く示唆されている。抗FIRs自己抗体はシェーグレン症候群や皮膚筋炎で報告されたが、大腸癌をはじめとするヒト癌患者血清における報告は見られない。今後、抗FIR/FIRΔexon2自己抗体のELISAによる迅速かつ正確な検出系の確立を目指し、抗FIR/FIRΔexon2自己抗体のELISAキットの開発と新規診断法の開発を目指す。

研究成果

• [雑誌論文] Capsular serotyping of Haemophilus influenzae by using matrix-associated laser desorption ionization-time of flight mass?spectrometry. (2018)
  • 著者名/発表者名: Takeuchi N, Segawa S, Ishiwada N, Ohkusu M, Tsuchida S, Satoh M, Matsushita K, Nomura F
  • 雑誌名: Journal of infection and chemotherapy : official journal of the Japan Society of Chemotherapy 巻: 18 ページ: 300062-66
  • DOI: 10.1016/j.jiac.2018.02.007
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] An improved in-house lysis-filtration protocol for bacterial identification from positive blood culture bottles with high identification rates by MALDI-TOF MS. (2018)
  • 著者名/発表者名: Tsuchida S, Murata S, Miyabe A, Satoh M, Takiwaki M, Matsushita K, Nomura F
  • 雑誌名: Journal of microbiological methods 巻: 18 ページ: 1684-1688
  • DOI: 10.1016/j.mimet.2018.03.014
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Variant in C-terminal region of intestinal alkaline phosphatase associated with benign familial hyperphosphatasaemia. (2018)
  • 著者名/発表者名: Ishige T, Itoga S, Utsuno E, Nishimura M, Yoshikawa M, Kato N, Matsushita K, Yokosuka O, Nomura F
  • 雑誌名: Journal of medical genetics 巻: 10 ページ: 47-53
  • DOI: 10.1136/jmedgenet-2017-104964
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Assessment by Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry of the Effects of Preanalytical Variables on Serum Peptidome Profiles Following Long-Term Sample Storage. (2018)
  • 著者名/発表者名: Tsuchida S, Satoh M, Umemura H, Sogawa K, Takiwaki M, Ishige T, Miyabayashi Y, Iwasawa Y, Kobayashi S, Beppu M, Nishimura M, Kodera Y, Matsushita K, Nomura F
  • 雑誌名: Proteomics. Clinical applications 巻: 15 ページ: 47-53
  • DOI: 10.1002/prca.201700047
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Surveillance evaluation of the standardization of assay values for serum total 25-hydroxyvitamin D concentration in Japan. (2018)
  • 著者名/発表者名: Ihara H, Kiuchi S, Ishige T, Nishimura M, Matsushita K, Satoh M, Nomura F, Yamashita M, Kitajima I, Tsugawa N, Okano T, Hirota K, Miura M, Totani M, Hashizume N, Nutrition Division,Japan Society of Clinical Chemistry.
  • 雑誌名: Annals of clinical biochemistry 巻: 10 ページ: 5570-5576
  • DOI: 10.1177/0004563218765570
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Locked Nucleic Acid Technology for Highly Sensitive Detection of Somatic Mutations in Cancer. (2018)
  • 著者名/発表者名: Ishige T, Itoga S, Matsushita K
  • 雑誌名: Advances in clinical chemistry 巻: 83 ページ: 53-72
  • DOI: 10.1016/bs.acc.2017.10.002
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Improved sensitivity of serum/plasma 1α,25-dihydroxyvitamin D quantification by DAPTAD derivatization. (2017)
  • 著者名/発表者名: Ishige T, Satoh M, Ogawa S, Nishimura M, Matsushita K, Higashi T, Nomura F
  • 雑誌名: Clinica chimica acta; international journal of clinical chemistry 巻: 473 ページ: 173-179
  • DOI: 10.1016/j.cca.2017.08.033
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Applications of copolymer for rapid identification of bacteria in blood culture broths using matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry. (2017)
  • 著者名/発表者名: Ashizawa K, Murata S, Terada T, Ito D, Bunya M, Watanabe K, Teruuchi Y, Tsuchida S, Satoh M, Nishimura M, Matsushita K, Sugama Y, Nomura F
  • 雑誌名: Journal of microbiological methods 巻: 139 ページ: 54-60
  • DOI: 10.1016/j.mimet.2017.04.013
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] <i>FIR</i> haplodeficiency promotes splicing to pyruvate kinase M2 in mice thymic lymphoma tissues revealed by six-plex tandem mass tag quantitative proteomic analysis (2017)
  • 著者名/発表者名: Asako Kimura, Kouichi Kitamura, Guzhanuer Ailiken, Mamoru Satoh, Toshinari Minamoto, Nobuko Tanaka, Fumio Nomura, Kazuyuki Matsushita
  • 雑誌名: Oncotarget 巻: 8 ページ: 67955-67965
  • DOI: 10.18632/oncotarget.19061
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A novel KCNQ1 nonsense variant in the isoform-specific first exon causes both jervell and Lange-Nielsen syndrome 1 and long QT syndrome 1: a case report. (2017)
  • 著者名/発表者名: Nishimura M, Ueda M, Ebata R, Utsuno E, Ishii T, Matsushita K, Ohara O, Shimojo N, Kobayashi Y, Nomura F
  • 雑誌名: BMC medical genetics 巻: 18 ページ: 66-71
  • DOI: 10.1186/s12881-017-0430-7
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Rapid and cost-effective high-throughput sequencing for identification of germline mutations of BRCA1 and BRCA2. (2017)
  • 著者名/発表者名: Ahmadloo S, Nakaoka H, Hayano T, Hosomichi K, You H, Utsuno E, Sangai T, Nishimura M, Matsushita K, Hata A, Nomura F, Inoue I
  • 雑誌名: Journal of human genetics 巻: 62 ページ: 561-567
  • DOI: 10.1038/jhg.2017.5
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] 【臨床検査の最前線-将来の検査を展望する】 総論 臨床検査の将来 ゲノム解析技術の進歩と臨床検査への応用 (2017)
  • 著者名/発表者名: 松下 一之
  • 雑誌名: 医学のあゆみ 巻: 263 ページ: 991-998
  • オープンアクセス
• [雑誌論文] 国内のバイオバンクの概況・臨床検査からみたバイオバンクの意義 (iPSバンクを含む国内のバイオバンクの現状と課題) (2017)
  • 著者名/発表者名: 松下 一之
  • 雑誌名: 臨床病理 巻: 65 ページ: 181-189
  • 査読あり
• [雑誌論文] 新規腫瘍マーカーと術後モニタリングマーカー候補としての消化器癌患者血清における抗FIRs自己抗体の検出 (2017)
  • 著者名/発表者名: 小林 崇平, 松下 一之、日和佐 隆樹
  • 雑誌名: 日本分子腫瘍マーカー研究会誌 巻: 32 ページ: 39
• [学会発表] Anti-FIRs (PUF60) auto-antibodies are detected in the sera of early-stage colon cancer patients. (2018)
  • 著者名/発表者名: Kazuyuki Matsushita and Sohei Kobayashi
  • 学会等名: Biomarker Research in Clinical Medicine.
  • 国際学会
• [学会発表] microRNA発現定量解析による高感度肺癌リンパ節転移検出法の開発 (2017)
  • 著者名/発表者名: 稲毛 輝長, 中島 崇裕, 藤原 大樹, 田中 教久, 坂入 祐一, 和田 啓伸, 鈴木 秀海, 岩田 剛和, 千代 雅子, 吉野 一郎, 松下 一之, 石毛 崇之, 糸賀 栄
  • 学会等名: 千葉医学雑誌
• [学会発表] 血液培養陽性検体よりの複数菌由来の核酸検出 (2017)
  • 著者名/発表者名: 西村 基, 村田 正太, 姚 躍, 土田 祥央, 田中 知明, 松下 一之
  • 学会等名: 日本臨床微生物学雑誌
• [学会発表] 治療法のある遺伝性疾患に対する遺伝学的検査と遺伝カウンセリングネットワークの構築 (2017)
  • 著者名/発表者名: 松下 一之
  • 学会等名: 調査研究ジャーナル
  • 招待講演
• [学会発表] 大腸癌根治切除例におけるバイオマーカーとしてのRAS、BRAF、MSI statusに関する検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 宮内 英聡, 大平 学, 加賀谷 暁子, 今西 俊介, 栃木 透, 丸山 哲郎, 松下 一之, 糸賀 栄, 石毛 崇之, 松原 久裕
  • 学会等名: 日本癌治療学会学術集会抄録集
• [学会発表] 固形がん(非大腸癌)に対するMSI(microsatellite instability)検査の重要性と課題について (2017)
  • 著者名/発表者名: 松下 一之, 石毛 崇之, 糸賀 栄, 西村 基, 澤部 祐司
  • 学会等名: 臨床病理
  • 招待講演
• [学会発表] 治療法・診断法がある遺伝性がんに対する千葉県内における検診体制の確立 (2017)
  • 著者名/発表者名: 松下 一之, 野村 文夫, 横井 左奈, 永瀬 浩喜, 市川 智彦
  • 学会等名: 日本癌学会総会記事
• [学会発表] 家族性ポリポーシスの層別化 (2017)
  • 著者名/発表者名: 高根 希世子, 松坂 恵介, 太田 聡, 福世 真樹, 西村 基, 酒井 英嗣, 松下 一之, 油谷 浩幸, 中谷 行雄, 松原 久裕, 赤木 究, 金田 篤志
  • 学会等名: 日本癌学会総会記事
• [学会発表] 新規慢性肝疾患マーカーFIC5.9(Fibrinogen alpha C chain 5.9 kD fragment)は凝固線溶の変動を反映する (2017)
  • 著者名/発表者名: 西村 基, 菊地 渉, 佐藤 守, 松下 一之, 小寺 義男, 田中 知明, 野村 文夫
  • 学会等名: 臨床化学
• [学会発表] 生化学自動分析装置を用いたICG測定法(長波長対照法)の開発 (2017)
  • 著者名/発表者名: 佐藤 有華, 清宮 正徳, 吉田 俊彦, 澤部 祐司, 松下 一之
  • 学会等名: 日本医学検査学会抄録集
• [学会発表] 架橋化核酸を用いた高感度サンガー法によるRAS遺伝子変異解析 (2017)
  • 著者名/発表者名: 石毛 崇之, 糸賀 栄, 松下 一之
  • 学会等名: 日本医学検査学会抄録集
• [学会発表] 当科における家族性大腸ポリポーシスに対する診療状況 (2017)
  • 著者名/発表者名: 大平 学, 宮内 英聡, 成島 一夫, 加賀谷 暁子, 武藤 頼彦, 斉藤 洋茂, 松原 久裕, 松下 一之
  • 学会等名: 日本大腸肛門病学会雑誌
• [学会発表] メディカルチェックで先天性QT延長症候群が疑われたプロスポーツ選手に対する遺伝カウンセリングの1例 (2017)
  • 著者名/発表者名: 内垣 洋祐, 西村 基, 上田 希彦, 岡田 将, 宇津野 恵美, 浦尾 充子, 別府 美奈子, 松下 一之, 野村 文夫, 長田 久夫, 羽田 明, 市川 智彦, 田中 知明, 山本 修一
  • 学会等名: 日本遺伝カウンセリング学会誌
• [学会発表] リンチ症候群2家系における未発症家系員の発症前診断と課題 (2017)
  • 著者名/発表者名: 松下 一之, 糸賀 栄, 石毛 崇之, 宇津野 恵美, 西村 基, 別府 美奈子, 内垣 洋祐, 野村 文夫, 澤部 祐司
  • 学会等名: 日本遺伝カウンセリング学会誌
• [学会発表] 千葉大学医学部附属病院における遺伝性神経疾患の発症前診断の現状と問題点 (2017)
  • 著者名/発表者名: 別府 美奈子, 宇津野 恵美, 浦尾 充子, 澤井 摂, 野村 文夫, 内垣 洋祐, 西村 基, 松下 一之, 桑原 聡, 田中 知明, 市川 智彦
  • 学会等名: 日本遺伝カウンセリング学会誌
• [学会発表] microRNA発現定量解析による高感度肺癌リンパ節転移検出法の開発 (2017)
  • 著者名/発表者名: 稲毛 輝長, 中島 崇裕, 藤原 大樹, 糸賀 栄, 石毛 崇之, 伊藤 祐輝, 小野里 優希, 松本 寛樹, 椎名 裕樹, 佐田 諭己, 畑 敦, 豊田 行英, 田中 教久, 坂入 祐一, 和田 啓伸, 鈴木 秀海, 岩田 剛和, 松下 一之, 千代 雅子, 吉野 一郎
  • 学会等名: 日本呼吸器外科学会雑誌
• [学会発表] 胚培養液を用いたミトコンドリアDNAの非侵襲的解析 (2017)
  • 著者名/発表者名: 曽根原 弘樹, 小林 達也, 石川 博士, 西村 基, 姚 躍, 西村 里美, 松下 一之, 大久保 毅, 瀬川 智也, 寺元 章吉, 田中 知明, 生水 真紀夫
  • 学会等名: 日本卵子学会誌
• [学会発表] Establishment of screening network for hereditary cancers by genetic testing and counselling in Chiba Prefecture. (2017)
  • 著者名/発表者名: Kazuyuki Matsushita.
  • 学会等名: 日本癌学会
• [学会発表] Current condition and issues of clinical biobanks in Japan (2017)
  • 著者名/発表者名: Kazuyuki Matsushita.
  • 学会等名: Global Biobank Week, ISBER (Stockholm, Sweden)
  • 国際学会
• [図書] In silico 創薬におけるスクリーニングの高速化・高精度化技術 (2018)
  • 著者名/発表者名: １．松下一之
  • 総ページ数: 500
  • 出版者: （株）技術情報協会
• [備考] 千葉大学病院 検査部
  • URL: https://www.ho.chiba-u.ac.jp/section/kensa/index.html
• [備考] 千葉大学病院 遺伝子診療部
  • URL: https://www.ho.chiba-u.ac.jp/section/idenshi/index.html
• [産業財産権] 芳香環含有化合物並びに癌の予防剤および／または治療剤 (2017)
  • 発明者名: 松下一之、星野忠治他
  • 権利者名: 国立大学法人千葉大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 特願2014-110822