| 研究課題/領域番号 |
17K09013
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
常岡 英弘 山口大学, 大学院医学系研究科, 教授 (40437629)
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| 研究分担者 |
大津山 賢一郎 山口大学, 大学院医学系研究科, 助教 (10432741)
徳田 信子 山口大学, 大学院医学系研究科, 教授 (70227578)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 猫ひっかき病 / ウエスタンブロット法 / IgM-WB |
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| 研究実績の概要 |
猫ひっかき病（Cat scratch disease: CSD）はBartonella henselae による感染症である。本菌は患者からの分離が困難なため、CSDの診断には血清学的方法が有用であり、本研究の第一目標はELISA法による特異B. henselae IgM抗体価測定法を確立することである。
研究１年目である本年度はウエスタンブロット法（WB）で特異B. henselae IgM抗原蛋白質の検出および同定を試みた。すなわち独自に改良したWBでB. henselae ATCC49882株抗原を使用して、臨床的にCSDが疑われた患者62例と健常人50例の各血清について、IgM-WB解析を行った。その結果、健常人ではいずれも反応する明らかなバンドは認めなかったが、患者血清では34例（55％）に反応バンドが認められた。これらバンドはすべての患者に共通したバンドは認めなかったが、8－10kD, 31－35kD, 70kDが主要バンドで、その半数は8－10kDであることが判明した。
そこで主要バンドのうち8－10kDについて、その蛋白質を抽出してMALDI/TOFMSを用いた質量分析法でCSD特異抗原蛋白質の同定を行った。その結果、9種類の蛋白質が検出され、infA, hupB, rplK, BHll790, LigA, BHl2580の6種類が同定された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
予想以上にCSD患者と健常人血清のIgM-WB解析に時間を要した。また主要なCSD特異バンドのうち、8－10kDから9種類の蛋白質が検出されたが、残りの3種類同定、および31－35kD, 70kDの解析は未だ行われていない。この一因はMALDI/TOFMS質量分析機器の不調にもよる。
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| 今後の研究の推進方策 |
1）CSD特異バンド8－10kDの9種類の蛋白質のうち、未同定3種類蛋白質の同定を試みる。
2）残りのCSD特異バンド31－35kDおよび70kDについて、蛋白質を抽出後、同様にMALDI/TOFMSを用いて蛋白質同定を行う。
3）特異抗原の組み換え蛋白質の作成：同定された各種蛋白質の遺伝子をクローニング後、大腸菌に発現させ、蛋白質を作成させる。さらにこれら発現蛋白質の抗原性をCSD患者血清を使用したIgM-WBで確認する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当初の研究計画より、研究がやや遅れている分、若干の経費余剰が生じた。上記今後の推進方策の実施を目指し、有効利用したい。
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