研究実績の概要 |
1) DPN病態モデル動物を確立した。 leptin 受容体異常db/db 肥満マウス(type II 相当)を若年から購入し、飼育しながら、その成長と体重の増加に伴う血糖値変化、疼痛行動との関連、疼痛過敏・感覚障害の発症の時期を確認した。疼痛行動はplantar test, acetone test, Von Frey test 法で評価した。4週齢から冷刺激と機械的疼痛過敏が観察された。 2) モデル動物におけるAMPK 、TRP チャネルの発現変化と、2 者の相関を解析した。 上記モデル動物の血糖値変化と疼痛行動の指標を参考に、後根神経節(DRG)ニューロンにおけるTRPA1チャネル、AMPK およびリン酸化AMPK の発現変化をWestern Blot 法、免疫染色法を用いて検討した。TRPA1トータルタンパク質の変化が見られなかったが、膜たんぱく質はdb/dbマウスにおいて増加した。また、リン酸化AMPKの減少が確認された。また、AMPK のactivatorを腹腔内注射し、DRGニューロンにおけるTRPA1チャネルの発現変化を検討したが、トータルタンパクの変化がないものの、膜TRPA1の減少が確認された。 3) モデル動物におけるAMPKとTRPチャネルとの機能連関の確認を確認した。 モデル動物のDRGの急性単離細胞を用い、各TRPチャネルの刺激薬(capsaicin,AITC) を投与することで上昇する細胞内Ca2+をFura-2 Ca2+imaging法で測定し、AMPKのactivatorによる影響を検討した。AMPKはAITCで惹起するCaの細胞内流入を抑制した。また、各TRPチャネルを介した内向き電流をホールセルパッチクランプ法で観察した。AMPKのactivatorの投与はAITCの内向き電流を抑制した。
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