| 研究課題/領域番号 |
17K09159
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
田邉 剛 山口大学, 大学院医学系研究科, 教授 (80260678)
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| 研究分担者 |
山口 奈津 山口大学, 大学院医学系研究科, 助教 (40450671)
高橋 秀和 山口大学, 大学院医学系研究科, 講師 (90450402) [辞退]
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 非ウイルス性肝がん / バイオマーカー / microRNA |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、非ウイルス性肝がんの新たなハイリスク群同定と早期診断システムの確立を目的としている。令和元年度も研究に使用する検体および臨床データの収集を進めながら、以下のバイオマーカーの解析を行った。
(1) 非ウイルス性肝がんにおいて、特異的に変化するmicroRNAの同定と、異なる進行度の段階での量的変化を明らかにするために、血中microRNAの解析を行っている。平成30年度までに、非ウイルス性肝がんと糖尿病の各群のプール血清をリアルタイムPCRにより解析し、群間で発現量が2倍以上変化するmicroRNA18種を明らかにした。このうち12種のmicroRNAについて個別血清を用いてリアルタイムPCRにより解析した。現在は、さらに検体数を増やし、他に５種類のmicroRNAも対象に加え、解析を進めている。
(2) 自然免疫因子等の遺伝子多型解析は、対照群である糖尿病患者の検体が不足しているため一時中断している。必要な検体数が揃い次第解析を進める。
(3) 当初の計画を一部変更し、肝癌特異的バイオマーカーとして非ウイルス性肝がんで特異的に発現する血中循環腫瘍DNA（ctDNA）を同定することを目的として、血清エクソソームに内包されるctDNAの解析の準備を進めている。血清から分離したエクソソームを用いる利点は、死細胞由来のcell-freeDNAを除ける点、血清採取時に混入した外部DNAを除ける点、エクソソーム内のDNAはcell-free DNAに比較して血中で安定的に存在すると想定される点である。令和元年度は、平成30年度に引き続き、研究協力者が開発した、エクソソームの物理化学的特性を保持した新たな調整法を参考に、細胞培養上清を用いたエクソソーム精製の条件検討を行った。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
令和元年度中、研究棟の予定外停電により冷凍試薬が融解するなどして半年ほど実験を中断したが、被害試薬の弁償を受け、現在解析を再開しているところである。
非ウイルス性肝がんで変化するmicroRNAについて、プール血清を用いた解析を行い18種類の候補を同定した。個々の症例における変化を明らかにするために、平成30年度までに12種類の候補microRNAについて個別血清を用いた測定を行ったところだが、令和元年度は解析対象のmicroRNAを5種類追加し、検体も追加して測定を進めている。
自然免疫因子等の遺伝子多型解析は、多型を検出するのに必要な対照群（糖尿病）の検体数が不足しているため、対象患者の選択基準「造影CTもしくは造影MRIにて肝癌が認められる」を緩和するなどして検体数を増やすことを検討している。
また計画変更により新たな解析項目として、血中エクソソーム中のctDNA解析を追加し、解析の準備を進めている。研究協力者が開発した、エクソソームの物理化学的特性を保持した新たな調整法はある程度の熟練が必要であり、現在さまざまな条件検討を再開しているところである。
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| 今後の研究の推進方策 |
非ウイルス性肝がんについて、同定したmicroRNAのバイオマーカーとしての有用性の検討を行う。さらに新規エクソソーム分離法について、従来法との比較検討を行う。
血中microRNAについては、候補として同定したもののうち17種類のmicroRNAを中心に解析を進める。個別の症例における定性的、定量的な解析を進め、非ウイルス性肝がんにおける特異性と、ステージの進行度との関連を明らかにし、診断だけで無く予後を推定するバイオマーカーとしての有用性を明らかにする。
血中エクソソーム由来ctDNA解析を目的とした血清エクソソームの精製については、細胞培養上清を用いてエクソソームの物理化学的特性を保持した新たな調整法の条件検討を行った後、血清からの精製を進める。同時に従来汎用されてきた精製kitを用いた方法も平行して行い、両者を比較して新規の調整法の優位性を検討する予定である。
自然免疫因子等の遺伝子多型解析は、対照群である糖尿病患者の検体収集が不足しているため、対象患者の選択基準「造影CTもしくは造影MRIにて肝癌が認められる」を緩和するなどして検体数を増やすことを検討している。必要な検体数が揃い次第解析を進める。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
令和元年度途中、研究棟の予定外停電により冷凍試薬が融解するなどして半年ほど実験が行えない時期があった。令和元年度に行う予定だった実験を次年度に行うため、次年度使用が生じた。また、自然免疫因子等の遺伝子多型解析については、検体が揃い次第解析を行うこととしたために、次年使用額が生じた。追加して収集した検体の解析にあたり、次年度に持ち越した研究費を充てる予定である。
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