自己免疫性肝疾患における疾患特異的T細胞受容体の高解像度解析と病態解明

2018 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 17K09416
• 研究機関: 信州大学
• 研究代表者: 梅村 武司 信州大学, 学術研究院医学系, 准教授 (30419345)
• 研究期間 (年度): 2017-04-01 – 2020-03-31
• キーワード: HLA-DPB1 / オートタキシン / AIH / PBC

研究実績の概要

本年度はPBCについてウルソデオキシコール酸治療開始前の肝生検施行時に採取された保存血清を用いて新しい肝線維化マーカーであるオートタキシンを測定し、PBCの肝線維化との相関、さらにはウルソデオキシコール酸投与1年後の変化を検討した。血中のオートタキシンは男性・女性で検討するとNakanuma分類の肝病理学的所見と有意な相関を示していることを証明した。さらに、治療開始後1年の時点では血中ALP、γGTPは有意に改善していた。肝線維化マーカーであるM2BPGiは治療前後で有意に低下していたがオートタキシンは有意な低下を認めなかった。以上よりオートタキシンはPBCにおいても肝線維化マーカーとして有効であることを明らかにした。(Joshita S, Umemura T, et al. Scientific Reports 2018)

HLA-DPB1の発現に関連しているrs9277534は今までにB型肝炎の治癒、造血幹細胞移植後の移植片対宿主病の発症に関連することが報告されている。本研究ではHLA-DPB1のアリルを決定したAIH 146名と健常人 326名についてアリルとrs9277534の関連性、日本人におけるHLA-DPB1の発現量について検討を行った。日本人でもrs9277534はHLA-DPB1の発現に関連していた。さらに、rs9277534ジェノタイプはHLA-DPB1アリルと強い連鎖不平衡を示した。HLA-DPB1アリルはAIHの疾患感受性と関連性は認めなかったがrs9277354Gアリルは有意にAIHと関連していることを証明し、ロジスティック回帰分析からHLA-DRB1*04:05アリルと独立した疾患感受性を持つことが明らかとなった。（Yamazaki T, Umemura T, et al. Scientific Reports 2018)

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

AIH 180名とPBC 350名、健常人325名についてはHLAのclass Iとclass IIのタイピングは終了している。AIHとPBCについて80名ずつランダムに抽出し、次世代シークエンサーで全HLA遺伝子のPCRを施行し、解析は終了して6桁から8桁のHLAのタイピングは終了している。健常人80名については現在測定中である。現在得られた塩基配列について従来から報告のある配列との相違を検討中である。新しいアリルの発見もあり投稿準備中である。
TCRのレパトア測定法については基礎実験を行っており順調に進展している。

今後の研究の推進方策

HLA領域のリシークエンシング解析は現在投稿準備中であるので早急に投稿を行う予定である。発見された変異について残りの検体で発見された多型・変異が病態と関連性があるか統計学的な検討を行い、確認をする予定である。
TCRのレパトア測定方法の再現性について確認を行い、AIH、PBC患者の検体を用いて解析を開始する予定である。

次年度使用額が生じた理由

本年度施行したオートタキシンの測定、rs9277534の測定には想定より費用がかからなかったため、次年度のTCRのレパトア解析について次年度使用額をあてることが出来るため測定系の確立，さらに健常者全ての解析が行えるようになった。より詳細かつ正確なデータ解析が行えると考えられる。

研究成果

• [雑誌論文] POGLUT1, the putative effector gene driven by rs2293370 in primary biliary cholangitis susceptibility locus chromosome 3q13.33 (2019)
  • 著者名/発表者名: Hitomi, Y. Ueno, K. Kawai, Y. Nishida, N. , Umemura, T. et al
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 9 ページ: 102
  • DOI: 10.1038/s41598-018-36490-1
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Genetics and epigenetics in the pathogenesis of primary biliary cholangitis (2018)
  • 著者名/発表者名: Joshita, S. Umemura, T. Tanaka, E. Ota, M.
  • 雑誌名: Clin J Gastroenterol 巻: 11 ページ: 11-18
  • DOI: 10.1007/s12328-017-0799-z
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Serum Autotaxin Is a Useful Disease Progression Marker in Patients with Primary Biliary Cholangitis (2018)
  • 著者名/発表者名: Joshita, S. Umemura, T. Usami, Y. Yamashita, Y. Norman, G. L. Sugiura, A. Yamazaki, T. Fujimori, N. Kimura, T. Matsumoto, A. Igarashi, K. Yoshizawa, K. Ota, M. Tanaka, E.
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 8 ページ: 8159
  • DOI: 10.1038/s41598-018-26531-0
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Clinical features of autoimmune hepatitis with acute presentation: a Japanese nationwide survey (2018)
  • 著者名/発表者名: Joshita, S. Yoshizawa, K. Umemura, T. Ohira, H. Takahashi, A. Harada, K. Hiep, N. C. Tsuneyama, K. Kage, M. Nakano, M. Kang, J. H. Koike, K. Zeniya, M. Yasunaka, T. Takaki, A. Torimura, T. Abe, M. Yokosuka, O. Tanaka, A. Takikawa, H. Japan Autoimmune Hepatitis Study, Group
  • 雑誌名: J Gastroenterol 巻: 53 ページ: 1079-1088
  • DOI: 10.1007/s00535-018-1444-4
  • 査読あり
• [雑誌論文] A cis-eQTL of HLA-DPB1 Affects Susceptibility to Type 1 Autoimmune Hepatitis (2018)
  • 著者名/発表者名: Yamazaki, T. Umemura, T. Joshita, S. Yoshizawa, K. Tanaka, E. Ota, M.
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 8 ページ: 11924
  • DOI: 10.1038/s41598-018-30406-9
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] Clinical significance of M2BPGi in patients with autoimmune liver disease (2019)
  • 著者名/発表者名: Umemura T
  • 学会等名: The Asian Pacific Association for the Study of the Liver STC
  • 国際学会 / 招待講演
• [学会発表] Noninvasive Prediction of Liver Fibrosis in Autoimmune Liver Disease (2019)
  • 著者名/発表者名: Umemura T
  • 学会等名: The Asian Pacific Association for the Study of the Liver STC
  • 国際学会 / 招待講演
• [学会発表] 自己免疫性肝疾患におけるKIR-HLAの検討 (2018)
  • 著者名/発表者名: 梅村武司、他
  • 学会等名: 第27回日本組織適合性学会大会
• [学会発表] 自己免疫性肝炎におけるHLA-DPB1の遺伝子多型とHLA-DP発現量の検討 (2018)
  • 著者名/発表者名: 梅村武司、山崎智生、城下智、田中榮司
  • 学会等名: 第54回日本肝臓学会総会
• [学会発表] 次世代シークエンサーによるHLAゲノム解析：自己免疫性肝疾患における検討 (2018)
  • 著者名/発表者名: 梅村武司、城下智、田中榮司
  • 学会等名: 第42回日本肝臓学会東部会