肝線維化の新規診断・治療法の確立を目指したlet-7の発現・機能解析

2021 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 17K09435
• 研究機関: 名古屋市立大学
• 研究代表者: 松浦 健太郎 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 講師 (30580576)
• 研究期間 (年度): 2017-04-01 – 2023-03-31
• キーワード: miRNA

研究実績の概要

申請者が本研究を立案するきっかけとなった先行研究の結果（Matsuura et al. Hepatology 2016）について、本邦の複数のC型慢性肝炎コホートから肝生検時の保存血清検体および臨床情報を収集し、末梢血let-7 レベルと肝線維化進展度との相関の再現性を検証した。その結果、血清および血清由来の細胞外小胞中のlet-7aの発現は肝線維化の進展に伴い減少することを再現した。さらに、血清中のlet-7発現レベルは他の線維化マーカーと良好な相関をみとめた（Matsuura et al. Open Forum Infct Dis. 2018）。また、治療によりC型肝炎ウイルスの排除された肝硬変患者の保存血清を用いて、その後の肝線維化・予備能の改善・悪化に関連するケモカイン/サイトカインの解析を進め、候補となるタンパクを見出した。別コホート検体による再現性の検証を行い、論文1編を投稿し、1編を作成中である。また、この検体を用いて血清中由来の細胞外小胞中のlet-7を含むmiRNAの網羅的発現解析を行い、候補となる複数のmiRNAを見出し、別コホートで検証中である。　一方、細胞内におけるlet-7の働きについて、ヒト肝星細胞株（LX-2)、線維芽細胞株を用いて検討した。LX-2をいくつかのサイトカインを加え活性化するとlet-7の発現レベルは有意に低下した。また、let-7をLX-2に導入後の肝線維化関連の遺伝子発現を解析したところ、肝線維化を抑制する傾向をみとめた。肝線維化を呈する非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）モデル動物の肝臓におけるlet-7および肝線維化関連分子の発現解析を施行した。現在、let-7 mimicをアテロコラーゲン、脂質ナノ粒子などを担体として投与し、肝線維化抑制効果について検討する実験をすすめている。

現在までの達成度 (区分)

4: 遅れている

理由

動物モデルを用いた検討については、コロナ渦の影響で遅れている。

今後の研究の推進方策

C型肝炎ウイルス排除後の肝線維化・予備能の改善・悪化に関連するケモカイン/サイトカインの解析に関する2編の論文を完結させる。また、患者血清を用いた肝線維化・予備能改善・悪化におけるmiRNAの関連について引き続き検討する。動物モデルを用いたlet-7の肝線維化抑制効果について検討をすすめ、細胞株を用いて得られた結果との整合性を検証する。すなわちlet-7 mimicを投与したこれらモデルの肝組織の遺伝子発現をRNAseq、マイクロアレイなどを用いて網羅的に検討し、肝線維化から発癌に至る分子機構の解明、新規の肝線維化治療薬としての確立を目指す。

次年度使用額が生じた理由

コロナ渦により研究が遅滞しているため。遅滞している実験計画を遂行する。

研究成果

• [雑誌論文] Liver-related events after direct-acting antiviral therapy in patients with hepatitis C virus-associated cirrhosis (2022)
  • 著者名/発表者名: Tahata Y, Hikita H, Mochida S, Enomoto N, Kawada N, Kurosaki M, Ido A, Miki D, Yoshiji H,Takikawa Y, Sakamori R, Hiasa Y, Nakao K, Kato N, Ueno Y, Yatsuhashi H, Itoh Y, Tateishi R, Suda G, Takami T, Nakamoto Y, Asahina Y, Matsuura K, et al.
  • 雑誌名: Journal of Gastroenterology 巻: 57 ページ: 120～132
  • DOI: 10.1007/s00535-021-01845-5
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characteristics and Prognosis of De Novo Hepatocellular Carcinoma After Sustained Virologic Response. (2021)
  • 著者名/発表者名: Toyoda H, Hiraoka A, Uojima H, Nozaki A, Shimada N, Takaguchi K, Abe H, Atsukawa M, Matsuura K, Ishikawa T, Mikami S, Watanabe T, Itobayashi E, Tsuji K, Arai T, Yasuda S, Chuma M, Senoh T, Tsutsui A, Okubo T, Ehira T, Kumada T, Tanaka J.
  • 雑誌名: Hepatology Communications 巻: 5 ページ: 1290～1299
  • DOI: 10.1002/hep4.1716
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A novel noninvasive formula for predicting cirrhosis in patients with chronic hepatitis C (2021)
  • 著者名/発表者名: Atsukawa M, Tsubota A, Kondo C, Uchida-Kobayashi S, Takaguchi K, Tsutsui A, Nozaki A, Chuma M, Hidaka I, Ishikawa T, Iwasa M, Tamai Y, Tobari M, Matsuura K, Nagura Y, Abe H, Kato K, Suzuki K, Okubo T, Arai T, Itokawa N, Toyoda H, Enomoto M, Tamori A, Tanaka Y, Kawada N, Takei Y, Iwakiri K.
  • 雑誌名: PLOS ONE 巻: 16 ページ: e0257166
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0257166
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Time‐course changes in liver functional reserve after successful sofosbuvir/velpatasvir treatment in patients with decompensated cirrhosis (2021)
  • 著者名/発表者名: Atsukawa M, Tsubota A, Kondo C, Toyoda H, Nakamuta M, Takaguchi K, Watanabe T, Hiraoka A, Uojima H, Ishikawa T, Iwasa M, Tada T, Nozaki A, Chuma M, Fukunishi S, Asano T, Ogawa C, Abe H, Kato K, Hotta N, Shima T, Matsuura K, et al.
  • 雑誌名: Hepatology Research 巻: 52 ページ: 235～246
  • DOI: 10.1111/hepr.13739
  • 査読あり
• [学会発表] HCV排除後の肝硬変患者における血清サイトカイン/ケモカイン発現解析 (2021)
  • 著者名/発表者名: 名倉義人、松浦健太郎、鈴木孝典、藤原圭、野尻俊輔、田中靖人
  • 学会等名: 第57回日本肝臓学会総会