膵癌における新規分子標的療法の解明；オートタキシンは治療ターゲットになるか？

2018 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 17K09466
• 研究機関: 名古屋市立大学
• 研究代表者: 吉田 道弘 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 助教 (20636328)
• 研究分担者: 内藤 格 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 講師 (30527750) ; 志村 貴也 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 講師 (90405192)
• 研究期間 (年度): 2017-04-01 – 2020-03-31
• キーワード: オートタキシン阻害剤 / 動物実験 / 血中濃度測定

研究実績の概要

A. オートタキシン阻害剤による膵癌細胞増殖抑制効果 ①膵癌増殖抑制効果の検証 (in vitro研究)：膵癌細胞株を培養ディッシュにまき、PF-8380 投与・非投与環境下での増殖能について比較したところ、両群に有意な差は認めなかった。②膵癌細胞増殖抑制効果の検証 (in vivo研究)：PF-8380を腹腔内に投与し、腫瘍の増大について経時変化を追ったところ、3週間の経時観察により、治療群で腫瘍増大抑制効果がみられた。B. オートタキシン阻害剤による膵癌細胞浸潤・転移抑制効果 ① 膵癌細胞浸潤抑制効果の検証：上記と同様にLPCから産生するLPA量が培地内では十分量ではないためか、in vitroでは有意な差が得られなかった。 ② 膵癌細胞転移抑制効果の検証：ルシフェラーゼ発現膵癌細胞株をマウスに移植。PF-8380投与 ・非投与群の2群に分け、イメージシステムを用いて追跡観察を行ったところ、3週間の経時観察の後、治療群では転移・播種巣の抑制が確認された。 C．オートタキシンの膵癌抗癌剤耐性獲得に関わる評価：In vitro実験ではPF-8380の効果が十分でないことが疑われたため、LPA存在・非存在下でのIC50の変化をまず確認した。すると、LPA存在下の方が抗癌剤感受性が低下していることがわかり、やはりLPAをターゲットとする意義が明らかとなった。本実験は現プロトコールではin vitroではなくin vivoの方が評価しやすいと判断された。
興味深いことに、マウスへの腫瘍移植モデルを用いてGEM投与によるオートタキシンの発現の変化が確認でき、腫瘍の増大および抗癌剤投与治療によりオートタキシン活性が変化していることが確認できた。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

①In vitroではATX阻害薬の効果を検証することができなかった。理由としては、10％FBS存在下の実験であったため、LPCだけでなくLPAがすでに存在していることが原因と考えられた。 そのため、In vitroの実験系を一部変更しプロトコールを見直し、条件設定に時間を要している。
②マウスへのPF-8380投与にあたり、投与によりマウスの体重減少が目立ち、経過中に死亡する例が散見された。逆に投与量が少ないと効果が得られなかったため、安全かつ効果が十分といえる投与量の設定に時間を要した。キットを用いてマウスの血中ATX活性値を測定して、投与量を決定した。
③治療実験経過中、コントロール側のマウス数が死亡により減少したため、統計学的な有意な差には至らず、来年度に再度マウスの数を増やして再検を要している。

今後の研究の推進方策

①プロトコールを一部改変して、昨年度行えなかったIn vitroの実験を遂行することと、昨年度行ったマウス実験をマウスの数をそろえて再度継続して行う。
②31年度として実験計画した以下を行う。A．臨床検体を用いたオートタキシン・LPA受容体発現と臨床像に関する検証 膵癌患者血液中のオートタキシン濃度を測定する。さらに、超音波内視鏡下生検法(EUS-FNA)にて採取され、病理組織学的に膵癌と診断された病理検体を用いてオートタキシンおよびLPA受容体の免疫染色を行い、腫瘍内発現の検討を行う。外科切除が施行された症例では外科切除標本に対して免疫染色を行い、腫瘍内・および切除組織の周囲組織におけるオートタキシン・LPA 受容体発現について解析する。解析から得られた発現レベルと、臨床結果の関連性につき検討を行う。

次年度使用額が生じた理由

実験の進行状況が遅れ、動物の購入などの購入予定も遅れているため。
次年度にはプロトコールの見直しのうえ、遅れた実験を中心に繰り越し分を使用する計画である。

研究成果

• [雑誌論文] Autoimmune Hemolytic Anemia Obscured by the Obstructive Jaundice Associated with IgG4-related Sclerosing Cholangitis in a Patient with Type 1 Autoimmune Pancreatitis: A Case Report and Review of the Literature. (2018)
  • 著者名/発表者名: Yoshida M, Marumo Y, Naitoh I, Hayashi K, Miyabe K, Nishi Y, Fujita Y, Jinno N, Hori Y, Natsume M, Kato A, Iida S, Joh T.
  • 雑誌名: Intern Med 巻: 57 ページ: 1725-1732
  • DOI: 10.2169/internalmedicine.9818-17
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] The absence of class III ホイ-tubulin is predictive of a favorable response to nab-paclitaxel and gemcitabine in patients with unresectable pancreatic ductal adenocarcinoma. (2018)
  • 著者名/発表者名: Kato A, Naiki-Ito A, Naitoh I, Hayashi K, Nakazawa T, Shimizu S, Nishi Y, Okumura F, Inoue T, Takada H, Kondo H, Yoshida M, Takahashi S, Joh T.
  • 雑誌名: Hum Pathol 巻: 74 ページ: 92-98
  • DOI: 10.1016/j.humpath.2018.01.009.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Differential diagnosis of cholangiocarcinoma and IgG4-related sclerosing cholangitis by fluorescence inツ?situ hybridization using transpapillary forceps biopsy specimens. (2018)
  • 著者名/発表者名: Kato A, Naitoh I, Miyabe K, Hayashi K, Kondo H, Yoshida M, Kato H, Kuno T, Takahashi S, Joh T.
  • 雑誌名: J Hepatobiliary Pancreat Sci 巻: 25 ページ: 188-194
  • DOI: 10.1002/jhbp.536
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] An Increased Chromosome 7 Copy Number in Endoscopic Bile Duct Biopsy Specimens Is Predictive of a Poor Prognosis in Cholangiocarcinoma. (2018)
  • 著者名/発表者名: Kato A, Naitoh I, Miyabe K, Hayashi K, Yoshida M, Hori Y, Natsume M, Jinno N, Asano G, Kato H, Kuno T, Takahashi S, Kataoka H.
  • 雑誌名: Dig Dis Sci 巻: 63 ページ: 3376-3381
  • DOI: 10.1007/s10620-018-5280-4.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Recanalization of postoperative biliary disconnection with intraductal cholangioscopy-assisted forceps retrieval of rendezvous guidewire. (2018)
  • 著者名/発表者名: Yoshida M, Morimoto M, Kato A, Hayashi K, Naitoh I, Miyabe K, Matsuo Y.
  • 雑誌名: Endoscopy 巻: 50 ページ: E338-E339
  • DOI: 10.1055/a-0667-7751
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] The utility and efficacy of self-expandable metal stents for treating malignant gastric outlet obstructions in patients under best supportive care. (2018)
  • 著者名/発表者名: Hori Y, Naitoh I, Hayashi K, Miyabe K, Yoshida M, Fujita Y, Natsume M, Jinno N, Kato A, Nakazawa T, Shimizu S, Hirano A, Okumura F, Ando T, Sano H, Takada H, Togawa S, Joh T.
  • 雑誌名: Support Care Cancer 巻: 26 ページ: 3587-3592
  • DOI: 10.1007/s00520-018-4221-2
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Covered duodenal self-expandable metal stents prolong biliary stent patency in double stenting: The largest series of bilioduodenal obstruction. (2018)
  • 著者名/発表者名: Hori Y, Naitoh I, Hayashi K, Kondo H, Yoshida M, Shimizu S, Hirano A, Okumura F, Ando T, Jinno N, Takada H, Togawa S, Joh T.
  • 雑誌名: J Gastroenterol Hepatol 巻: 33 ページ: 696-703
  • DOI: 10.1111/jgh.13977.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] Autotaxin inhibition suppresses colon cancer growth and metastasis (2018)
  • 著者名/発表者名: Michihiro Yoshida
  • 学会等名: 日本癌学会総会
  • 国際学会
• [学会発表] 当院におけるSpyGlass DS胆管内手技－狙撃生検・砕石・ドレナージ－の検討：内視鏡診断・治療への貢献 (2018)
  • 著者名/発表者名: 吉田 道弘
  • 学会等名: JDDW2018
• [学会発表] 難治性総胆管結石におけるSpyGlass DS適正使用の検討―EPLBD下治療困難例の解析から (2018)
  • 著者名/発表者名: 吉田 道弘
  • 学会等名: 第61回日本消化器内視鏡学会東海支部例会
• [学会発表] 当院におけるSpyGlass DS使用の現状：診断と治療への貢献 (2018)
  • 著者名/発表者名: 吉田 道弘
  • 学会等名: 日本消化器病学会東海支部第128回例会