| 研究課題/領域番号 |
17K09570
|
|---|
| 研究機関 | 東京医科歯科大学 |
|---|
研究代表者 |
前嶋 康浩 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 講師 (40401393)
|
|---|
| 研究分担者 |
小西 正則 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 助教 (70792018) [辞退]
磯部 光章 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 非常勤講師 (80176263)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
|
| キーワード | 心不全 / インフラマソーム / オートファジー |
|---|
| 研究実績の概要 |
本研究の目的は、心筋において選択的オートファジーによりインフラマソームを分解する分子機序を解明し、このメカニズムが機能不全に陥ることによる心不全の発症および病状進展の抑制を目的とした創薬シーズを探索して、新規の心不全治療法の開発を目指すことである。この目的を達成するために、前年度までにマウスに大動脈縮窄術を施して作成した圧負荷モデルマウスを用いた検討を行い、オートファジー阻害群とプロテアソーム阻害群は対照群と比較して有意に心機能が低下し、心筋のダメージや線維化が悪化することと、オートファジー阻害群とプロテアソーム阻害群を比較したところ、オートファジー阻害群の方でよりインフラマソームの量や活性が抑制されており、インフラマソームの分解にはユビキチン・プロテアソーム系よりもオートファジーの方がより重要な役割を果たしている可能性を示唆するデータを得た。次に、Flag-NLRP3リコンビナントタンパクを各々磁気ビーズが結合した抗Flag抗体と反応させた上で、上記で作成した圧負荷モデル由来の心筋組織抽出液と免疫沈降反応を行ったところ、MARCH7やTRIM20とNLRP3の間に相互作用があることが明らかとなった。shRNA-MARCH7、shRNA-TRIM20ならびにshRNA-Scrambleをコードしたレンチウイルスを新生仔ラット培養心筋細胞に感染させ、これらの細胞にインフラマソーム活性化剤であるLPSを添加してインフラマソーム活性におよぼすMARCH7やTRIM20の影響について検討したところ、これらの分子をノックダウンした心筋細胞ではインフラマソームの活性が有意に上昇することが明らかとなった。また、MARCH7およびTRIM20をノックダウンした心筋細胞では、選択的オートファジーの活性が低下することも示された。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
in vivoおよびin vitro実験を通して、インフラマソームの分解にはユビキチン・プロテアソーム系よりもオートファジーの方がより重要な役割を果たしている可能性を示唆するデータが得られ、そのメカニズムにおいてMARCH7とTRIM20が重要な役割を果たしていることが示されたため。
|
| 今後の研究の推進方策 |
令和元年以降も当初の計画に沿った実験を継続し、期限内に目的を達成できるよう努める方針である。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
導入が遅れているMARCH7 / TRIM20ノックアウトマウスの作成費用に充てるため、平成30年度に使用する予定であった予算を次年度（令和元年度）に使用する予定としたため。
|
