MUC5B過剰発現マウスを用いた肺線維症の病態解明と治療法の開発

2018 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 17K09611
• 研究機関: 三重大学
• 研究代表者: 田口 修 三重大学, 医学系研究科, リサーチアソシエイト (90197244)
• 研究分担者: GABAZZA CORINA 三重大学, 医学系研究科, 特任助教(研究担当) (10750656) ; 戸田 雅昭 三重大学, 医学系研究科, 講師 (10202201) ; 小林 哲 三重大学, 医学部附属病院, 准教授 (20437114)
• 研究期間 (年度): 2017-04-01 – 2020-03-31
• キーワード: rs35705950単塩基多型 / 遺伝子改変マウス / ムチン / 肺線維症 / TGFbeta1

研究実績の概要

Mucin 5B遺伝子のプロモーターの単塩基多型であるrs35705950は特発性肺線維症との関連性が複数の研究で示されている。本研究の目的はヒトrs35705950の単塩基多型の過剰発現トランジェニックマウスを用いて肺線維症マウスモデルを作製し、in vivo 実験によってMucin 5B遺伝子が間質性肺炎・肺線維症の病態形成に関与するかを検討する。平成30年度では本プロジェクトの研究を行い、以下の成果を得てきた：1）肺線維症におけるモデルMUC5Bのrs35705950単塩基多型の役割についての再現性実験：前年度に行った実験と同様の方法でマウスの背部の皮下に埋め込んだ浸透圧ポンプを用いてヒトMUC5Bのrs35705950単塩基多型のトランジェニックマウスにブレオマイシンを一週間連続皮下投与し、肺線維症モデルを作製した。コントロールとしてlittermateのC57BL/6野生型マウスを用いて同様の方法で肺線維症モデルを作製した。その結果、前年度に行った実験と同様の結果を得た。ブレオマイシンを投与した野生型マウスに比べ、MUC5Bのトランジェニックマウスでは気管支肺胞洗浄液の総細胞数及び肺線維症の程度は有意に低下した。コントロール群では有意な変化が認められなかった。2）前年度に作製したヒトMUC5Bのrs35705950単塩基多型とヒトTGF-beta1高発現のダブルトランジェニックマウスの検討を行った。ヒトMUC5BおよびヒトTGF-beta1ともにヘテロの個体を得たことをPCR法で確認した。肺線維症の発症程度の比較検討を行ったところ、ダブルトランジェニックマウスでは、TGF-beta1高発現トランスジェニックマウスに比べ、肺線維症の程度は有意に高度でした。

現在までの達成度 (区分)

1: 当初の計画以上に進展している

理由

平成30年度では既にできた組み換え改変マウスを使用したため研究の目標が速やかに達成できている。

今後の研究の推進方策

平成31年度では以下の実検を行う予定である：
１）ブレオマイシン誘発肺線維症モデルマウスを用いた肺線維症モデルマウスにおけるMUC5B siRNA効果の検討：マウスの背部の皮下に埋め込んだ浸透圧ポンプを用いてC57BL/6のマウスにブレオマイシンを一週間連続皮下投与し、肺線維症モデルを作製する。ブレオマイシン誘発肺線維症モデルマウスに、週3回、MUC5B siRNA又はscrambled siRNAを経気管支的に投与する。3週間目にマウスを解剖してmicroCT検査、血液、BALF中の炎症性サイトカイン、成長因子を測定する。また、肺組織のhydroxyprolineの含量、コラーゲンの濃度、組織学的変化、Ashcroftスコアで肺線維症の程度を評価する。２）MUC5Bトランジェニックマウスを用いたブレオマイシン誘発肺線維症モデルマウスにおける細胞内シグナル伝達機構の抑制効果：MUCBの発現にNFkappaBの経路が活性化されることが知られている。本研究でMUC5Bトランジェニックマウスを用いたブレオマイシン誘発肺線維症モデルマウスにおけるNFkappaB, AP-1などの細胞内伝達機構のキナーゼを、野生型マウスと比較して、検討する。

研究成果

• [雑誌論文] Protein S is Protective in Acute Lung Injury by Inhibiting Cell Apoptosis (2019)
  • 著者名/発表者名: Baffour Tonto Prince、Yasuma Taro、Kobayashi Tetsu、D’Alessandro-Gabazza Corina、Toda Masaaki、Saiki Haruko、Fujimoto Hajime、Asayama Kentaro、Fujiwara Kentaro、Nishihama Kota、Okano Tomohito、Takeshita Atsuro、Gabazza Esteban
  • 雑誌名: International Journal of Molecular Sciences 巻: 20 ページ: 1082～1082
  • DOI: 10.3390/ijms20051082
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Renal Injury during Long-Term Crizotinib Therapy (2018)
  • 著者名/発表者名: Yasuma Taro、Kobayashi Tetsu、D’Alessandro-Gabazza Corina、Fujimoto Hajime、Ito Kentaro、Nishii Yoichi、Nishihama Kota、Baffour Tonto Prince、Takeshita Atsuro、Toda Masaaki、Gabazza Esteban、Taguchi Osamu、Yonemura Shigenori、Hataji Osamu
  • 雑誌名: International Journal of Molecular Sciences 巻: 19 ページ: 2902～2902
  • DOI: 10.3390/ijms19102902
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Identification of Halophilic Microbes in Lung Fibrotic Tissue by Oligotyping (2018)
  • 著者名/発表者名: D’Alessandro-Gabazza Corina N.、M'endez-Garcia Celia、Hataji Osamu、Westergaard Sara、Watanabe Fumiaki、Yasuma Taro、Toda Masaaki、Fujimoto Hajime、Nishihama Kota、Fujiwara Kentaro、Taguchi Osamu、Kobayashi Tetsu、Mackie Roderick I.、Cann Isaac、Gabazza Esteban C.
  • 雑誌名: Frontiers in Microbiology 巻: 9 ページ: 1892～1892
  • DOI: 10.3389/fmicb.2018.01892
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Comparable immunoreactivity rates of PD-L1 in archival and recent specimens from non-small cell lung cancer (2018)
  • 著者名/発表者名: Nakamura Yuki、Kobayashi Tetsu、Nishii Yoichi、Suzuki Yuta、Saiki Haruko、Ito Kentaro、Watanabe Fumiaki、Nishihama Kota、Yasuma Taro、D'Alessandro-Gabazza Corina N.、Katsuta Koji、Fujimoto Hajime、Gabazza Esteban C、Taguchi Osamu、Hataji Osamu
  • 雑誌名: Thoracic Cancer 巻: 9 ページ: 1476～1482
  • DOI: 10.1111/1759-7714.12861
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Risks of Treating Idiopathic Pulmonary Fibrosis with a TAM Receptor Kinase Inhibitor (2018)
  • 著者名/発表者名: D’Alessandro-Gabazza Corina N.、Kobayashi Tetsu、Gabazza Esteban C.
  • 雑誌名: American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine 巻: 198 ページ: 970～971
  • DOI: 10.1164/rccm.201805-0871LE
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] 間質性肺炎の病態形成・線維化における凝固線溶系の関わり (2018)
  • 著者名/発表者名: 藤本 源、小林 哲、樋口 友里恵、齋木 晴子、藤原 拓海、岡野 智仁、浅山 健太郎、都丸 敦史、高橋 佳紀、藤原 研太郎、大西 真裕、中原 博紀、ガバザ エステバン、田口 修
  • 学会等名: 第58回日本呼吸器学会学術講演会
• [学会発表] KL-6やフェリチンが低値であったにも関わらず急速に呼吸不全が進行したMDA5抗体陽性CADMの1例 (2018)
  • 著者名/発表者名: 樋口 友里恵、高橋 佳紀、藤本 源、齋木 晴子、岡野 智仁、藤原 拓海、浅山 健太郎、都丸 敦史、藤原 研太郎、中原 博紀、小林 哲、ガバザ エステバン、田口 修
  • 学会等名: 第131回日本結核病学会東海地方大会 第113回日本呼吸器学会東海地方学会
• [学会発表] MMP-2はマクロファージをM1に分化誘導し気管支喘息に対して防御的に働く (2018)
  • 著者名/発表者名: 藤本 源、小林 哲、樋口 友里恵、齋木 晴子、岡野 智仁、藤原 拓海、浅山 健太郎、高橋 佳紀、都丸 敦史、藤原 研太郎、中原 博紀、ガバザ エステバン
  • 学会等名: 第67回日本アレルギー学会学術大会
• [学会発表] 当院におけるEGFR遺伝子変異陽性肺癌患者に対する免疫チェックポイント阻害薬の使用経験 (2018)
  • 著者名/発表者名: 岡野 智仁、樋口 友里恵、齋木 晴子、藤原 拓海、浅山 健太郎、都丸 敦史、高橋 佳紀、藤原 研太郎、中原 博紀、藤本 源、小林 哲、伊藤 健太郎、田口 修、ガバザ エステバン
  • 学会等名: 第113回日本肺癌学会中部支部学術集会
• [学会発表] 発症後20年経過したALK融合遺伝子陽性肺癌の1例 (2018)
  • 著者名/発表者名: 樋口 友里恵、齋木 晴子、岡野 智仁、藤原 拓海、浅山 健太郎、都丸 敦史、高橋 佳紀、藤原 研太郎、中原 博紀、藤本 源、小林 哲、ガバザ エステバン、田口 修
  • 学会等名: 第113回日本肺癌学会中部支部学術集会
• [学会発表] マウス肺線維化モデルに対するPeriostin抑制効果の検討 (2018)
  • 著者名/発表者名: 都丸 敦史、ガバザ エステバン、樋口 友里恵、齋木 晴子、藤原 拓海、浅山 健太郎、岡野 智仁、高橋 佳紀、藤原 研太郎、中原 博紀、藤本 源、戸田 雅昭、ガバザ コリナ、小林 哲
  • 学会等名: 第48回吸入療法研究会
• [学会発表] Creating a prediction formula for resting energy consumption of patients with COPD and ILD (2018)
  • 著者名/発表者名: Keisuke Morikawa, Yasunori Imaoka, Hiroyuki Takemura, Kana Kitayama, Shunta Shimoda, Shogo Inaba, Haruka Kusuki, Yu Hashitsume, Momoko Hirose, Yuta Suzuki, Makoto Okada, Corina N. D’Alessandro-Gabazza, Esteban Gabazza, Osamu Taguchi, Osamu Hataji
  • 学会等名: ERS 2018 International Congress
  • 国際学会
• [学会発表] Coagulation markers in COPD (2018)
  • 著者名/発表者名: Gunnar Reksten Husebo, Esteban Gabazza, Corina D'Alessandro, Marianne Aanerud, Masaaki Toda, Rune Gronseth, Per S. Bakke, Tomas Mikal Lind Eagan
  • 学会等名: ERS 2018 International Congress
  • 国際学会