| 研究課題/領域番号 |
17K09629
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| 研究機関 | 帝京大学 |
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研究代表者 |
鈴川 真穂 帝京大学, 医学部, 助手 (20453699)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | IgA / 肺線維芽細胞 / 細胞増殖 / サイトカイン / TfR / CD71 |
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| 研究実績の概要 |
背景：アレルギー疾患においては、抗原チャレンジ後、粘膜局所に抗原特異的IgAが増加することが報告されていることから、アレルギー疾患におけるIgAの重要な役割が推測される。代表的なアレルギー疾患である気管支喘息では、特に重症例において、肺線維芽細胞（NHLF）による気道リモデリングを認め、NHLFが病態形成に役割を演じる。
目的：本研究は IgAのNHLFに対する作用を解明することを目的とする。
方法： IgA単量体、sIgA（分泌型IgA）がNHLFに与える影響を解析した。サイトカイン産生レベルをqPCRおよびCBAで測定した。細胞増殖能はBrdU取り込みにより、一部のタンパク発現はWestern Blotにより解析した。また、IgAの責任レセプターを明らかにするため、フローサイトメトリーで解析し、そのレセプターをsiRNAによりノックダウンした上で、IgAの作用を解析した。
結果： sIgAは濃度依存的にNHLFのIL-6、IL-8、MCP-1、GM-CSFのmRNA発現およびタンパク発現を増強した。また、sIgAはNHLFの増殖を亢進し、コラーゲンゲル収縮能も増強した。さらに、線維芽細胞から筋線維芽細胞への分化により発現が増強するα-SMA およびタイプ１コラーゲンの産生も増強した。sIgAの作用は200 μg/mlまで濃度依存的に増強した。NHLFは遺伝子レベル、タンパクレベルで既知のIgAレセプターの一種、transferrin receptor (TfR/CD71)を発現しており、その他のレセプターの発現は認めなかった。TfRをSiRNAでノックダウンし、sIgAを作用させたところ、一部サイトカイン産生増強作用が抑制され、sIgAのNHLFに対する作用は、少なくとも一部はTfRを解していることが示唆された。
考察：sIgAはTfRを介したNHLFからのサイトカイン、ケモカイン産生能の増強およびNHLFの活性化作用により、呼吸器炎症を増悪する可能性が示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
今年度は、sIgAが肺線維芽細胞からのサイトカイン産生、増殖能、コラーゲンゲル収縮能、α-SMA およびタイプ１コラーゲン産生能を増強すること、およびその責任レセプターを見出し、英文誌に公表した。また、昨年度解析したsIgAによる気道上皮細胞の活性化機構についても臨床検体を用いた研究結果と共にまとめており、英文誌に投稿予定となっている。
ここまでの進捗は、ほぼ計画通りであり、次年度以降、動物モデルを用いた研究の解析を進める予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
気道上皮細胞株BEAS-2Bおよび肺線維芽細胞を用いたin vitroの実験では、sIgAによる上皮細胞および線維芽細胞の強力な活性化作用が明らかになった。さらに現時点で、臨床検体を用いた実験、すなわち、気管支喘息患者など呼吸器疾患の手術肺をIgAおよびIgAレセプター、TfRに対する特異的抗体で免疫染色し、その発現レベルと局在を明らかにすること、および、疾患の有無によるIgAに対する反応性の変化を解析中である。来年度は、さらに動物実験を加え、成果をまとめる方針である。これまでの動物実験の予備検討では、IgAの作用を見出しているものの、その機序については検討できていないため、機序についての研究を進める予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
細胞株を用いた実験に必要な経費として、ほぼ計画通りに研究費を使用していたが、予想以上にデータが順調に揃ったため、59947円未使用分が生じた。
しかしながら、次年度は実験動物を用いた、より費用のかかる実験を予定しており、これまで以上に試薬が必要になる可能性があると考えている。
したがって、残金も試薬代等として、次年度に用いる予定としている。
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