先天性腎尿路異常の新規原因遺伝子CBWD1の細胞内での役割

2018 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 17K09689
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 神田 祥一郎 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (60632651)
• 研究期間 (年度): 2017-04-01 – 2020-03-31
• キーワード: 先天性腎尿路異常 / 腎臓発生 / GATA3

研究実績の概要

平成30年度は細胞内でのCBWD1の役割についてin vitro解析を行った。CBWD1と同様に尿管芽の細胞核内に発現し、KOマウスが同じような表現型（CAKUT：水腎症、重複尿管）を呈する遺伝子であるGATA3に注目し、両者の相互作用を解析した。
①CBWD1とGATA3の共局在：マウス胎仔腎切片を用いて免疫染色を行い、両者が尿管芽細胞核内に共局在することを確認した。　②CBWD1とGATA3の結合：HEK293T細胞を用いて両者を強制発現し、免疫沈降法により両者の結合を確認した。次にGST-CBWD1タンパクを作成・精製し、GATA3との結合をGSTプルダウン法にて証明した。　③CBWD1のGATA3機能への影響：GATA3は転写因子であるため、その活性にCBWD1が影響を与える可能性を考えルシフェラーゼアッセイを行ったところ、CBWD1を用いることでGATA3活性が増加することが分かった。
以上よりCBWD1はGATA3の機能を修飾する作用があることが明らかとなった。

現在までの達成度 (区分)

1: 当初の計画以上に進展している

理由

CBWD1の細胞内での役割について、蛋白の発現、結合、活性への影響とメカニズムが明らかとなったため。

今後の研究の推進方策

平成31年度はこれまでの結果を論文化することを目指す。
CBWD1の下流遺伝子をRNA-seqを行い明らかにする。

次年度使用額が生じた理由

in vitro実験が想定よりも早く進んでいるため。

研究成果

• [雑誌論文] Clinically diverse phenotypes and genotypes of patients with branchio-oto-renal syndrome. (2018)
  • 著者名/発表者名: Unzaki A, Morisada N, Nozu K, Ye MJ, Ito S, Matsunaga T, Ishikura K, Ina S, Nagatani K, Okamoto T, Inaba Y, Ito N, Igarashi T, Kanda S, Ito K, Omune K, Iwaki T, Ueno K, Yahata M, Ohtsuka Y, Nishi E, Takahashi N, Ishikawa T, Goto S, Okamoto N, Iijima K
  • 雑誌名: J Hum Genet 巻: 63 ページ: 647-656
  • DOI: 10.1038/s10038-018-0429-8
  • 査読あり
• [雑誌論文] Amnionless-mediated glycosylation is crucial for cell surface targeting of cubilin in renal and intestinal cells. (2018)
  • 著者名/発表者名: Udagawa T, Harita Y, Miura K, Mitsui J, Ode KL, Morishita S, Urae S, Kanda S, Kajiho Y, Tsurumi H, Ueda HR, Tsuji S, Saito A, Oka A
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 8 ページ: 2351
  • DOI: 10.1038/s41598-018-20731-4
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] 腹部 尿路感染症 (2018)
  • 著者名/発表者名: 神田祥一郎
  • 雑誌名: 日本小児放射線学会誌 巻: 34 ページ: 13-22
• [雑誌論文] 先天性腎尿路異常の遺伝子解析 (2018)
  • 著者名/発表者名: 神田祥一郎 服部元史
  • 雑誌名: 発達腎研究会誌 巻: 26 ページ: 24-27
• [雑誌論文] CAKUTの腎外合併症 (2018)
  • 著者名/発表者名: 神田祥一郎 服部元史
  • 雑誌名: 腎と透析 巻: 85 ページ: 557-561
• [雑誌論文] アシドーシス・アルカローシス (2018)
  • 著者名/発表者名: 神田祥一郎
  • 雑誌名: 小児疾患の診断治療基準 巻: 50 ページ: 124-125
• [学会発表] CAKUTの腎移植 遺伝子検査の臨床的意義、シンポジウム「長期生着を考慮した小児移植の展望（再移植、再々移植への取り組み）小児移植腎のグラフトロス時、あなたならどうする？」 (2018)
  • 著者名/発表者名: 神田祥一郎 三浦健一郎 服部元史
  • 学会等名: 第54回日本移植学会総会
  • 招待講演
• [学会発表] ANCA関連血管炎、シンポジウム「小児期血管炎の急性期治療と長期管理～現状と今後の展望～」 (2018)
  • 著者名/発表者名: 神田祥一郎
  • 学会等名: 第38回日本川崎病学会・学術集会
  • 招待講演
• [学会発表] 長引く腰背部痛を認めADHDと診断されたADPKDの1女児例 (2018)
  • 著者名/発表者名: 神田祥一郎 笠原諭 谷口洋平 長澤武 久富隆太郎 伴英樹 薮内智朗 金子直人 高木陽子 石塚喜世伸 三浦健一郎 服部元史
  • 学会等名: 第53回日本小児腎臓病学会学術集会
• [学会発表] IFT140遺伝子異常によるネフロン癆の1例 (2018)
  • 著者名/発表者名: 神田祥一郎 堀田茂 森貞直哉 野木歩美 下田麻伊 小野真由美 神田祥子 横山晶一郎 高橋寛 横山美貴 飯田貴也 谷口洋平 長澤武 伴英樹 白井陽子 金子直人 薮内智朗 高木陽子 石塚喜世伸 三浦健一郎 飯島一誠 服部元史
  • 学会等名: 第27回発達腎研究会