| 研究課題/領域番号 |
17K09750
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| 研究機関 | 新潟大学 |
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研究代表者 |
石原 智彦 新潟大学, 脳研究所, 助教 (70612232)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | ALS / TDP-43 / 選択的スプライシング |
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| 研究実績の概要 |
当初の予定通り，平成29年度に 1) 剖検組織でのTDP-43 mRNA の選択的スプライシング（AS）多様性の確認，定量，2) 組織中でのTDP-43 mRNA ASに関与する 因子の解析を行った．
1) ALS罹患患者および対象疾患剖検脊髄（n=10）よりmRNAを抽出した．TDP-43 exon6 内に存在する内在性intronであるintron 6 の解析を行った．同領域のPCR産物のアガロースゲル電気泳動にて，ALS群に有意に多く発現するASパターンが存在することを見出した．同PCR産物を用い，TAクローニングを行い，複数種類の特異的AS配列を確認した．次いで各AS配列を特異的に認識する定量PCR primer，probe を作成し，逆転写定量PCR法，digital droplet PCR法にてTDP-43 AS mRNA定量を実施した．その結果，ALS脊髄では対照群と比較して，3種類のTDP-43 AS mRNA発現が増加していることを見出した．
2)また Splicing site の認識に関わる spliceosome 関連蛋白の解析を行った．RabinらによるALS脊髄でのmRNA発現検討（Hum Mol Genet，2010)では，spliceosome 関連蛋白のうちSNRNP48KのALS脊髄での低下が示されている．我々は，SNRNP48K に加え，spliceosome 関連蛋白のSNRPA，ZRSR2，SNRNP 59K mRNAの発現量を定量PCR法にて確認した．その結果，SNRNP48Kの発現量がTDP-ASの変化に相関していることを見いだした．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初計画した予定に準じ，平成29年度に 1) 剖検組織でのTDP-43 mRNA の選択的スプライシング（AS）多様性の確認，定量，2) 組織中でのTDP-43 mRNA ASに関与する 因子の解析を行えている．
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| 今後の研究の推進方策 |
当初の予定どおり，TDP-43 mRNA ASに由来する蛋白質の性状について解析を行う．
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| 次年度使用額が生じた理由 |
予定した研究が順調に進行したため，使用予算が当初見込みより減額された．
次年度以降も当初計画の予定に準じ，解析を進めていく．
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